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牛白细胞介素2基因的克隆及原核表达

申宏旺  
【摘要】: 根据GenBank发表的牛IL-2基因(M13204)序列设计并合成一对特异性引物,以经ConA诱导的健康黑白花奶牛外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出500bp大小的目的片段,将其连接到pMD18-T Simple载体上并转化DH5α感受态细胞,提取质粒进行鉴定并进行序列测定。测序结果显示,克隆的基因序列全长501个碱基,包含一个由465个碱基组成的完整的开放阅读框,其编码由155个氨基酸构成的蛋白质,此基因序列与参考的牛IL-2基因序列同源性为99.8%,证实已成功克隆到黑白花奶牛的IL-2基因。 将克隆的黑白花奶牛IL-2基因正向亚克隆到表达载体pGEX-2T的相应位点,构建重组表达载体pGEX-BoIL2,转化E.coli BL21感受态细胞,用1mM的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,经诱导的重组菌在相对分子量约为43kD处有明显的蛋白质表达条带,而未经诱导的重组菌在43kD处无条带产生。结果表明重组表达载体pGEX-BoIL2成功表达GST-BoIL2融合蛋白,其中黑白花奶牛IL-2分子量为17kD,与预期的黑白花奶牛IL-2蛋白大小一致。 本研究成功的对黑白花奶牛IL-2基因进行了克隆和表达,为黑白花奶牛IL-2进一步作为治疗剂在抗感染、抗病毒和作为疫苗佐剂及构建基因工程活载体疫苗奠定了基础。


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