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治疗奶牛乳房炎的复方中药制剂的开发研究

李成应  
【摘要】: 本文在分离出奶牛乳房炎主要致病菌的基础上,采用正交实验设计筛选出治疗奶牛乳房炎的中药复方制剂秦公散,并对该制剂开展了药效学、临床疗效及部分药学研究,旨在为兽医临床开发一种安全、高效、使用方便的治疗奶牛乳房炎的中药复方制剂。 复方中药制剂的筛选研究采用牛津杯法测定了30种中药对奶牛乳房炎主要致病菌的抑菌作用强度、采用试管2倍稀释法测定了部分敏感中药的最小抑菌浓度(MIC)和药物间协同指数(FIC);试验结果表明,金黄色葡萄球菌对连翘、诃子、秦皮、千里光、地锦草、半枝莲、乌梅、白芍极度敏感;对漏芦、凤尾草、野菊花、黄柏、十大功劳、丹参高度敏感;对金银花、大青叶、败酱草、蒲公英、皂角刺、紫花地丁、川芎、青皮、苦参、红花敏感;大肠杆菌对乌梅高度敏感;对诃子、秦皮、地锦草敏感;乌梅、金银花、连翘等药物之间具有较好的协同作用;秦皮、蒲公英、皂角刺之间有较好的协同作用。以中兽医理论为指导,根据药物之间的协同作用,设计了两种方案,采用正交实验设计,对其开展了中药组方的优化研究。结果表明,筛选出的组方Ⅰ具有良好的体外抗菌活性(MIC为0.25g/mL),组方Ⅰ加味后(秦公散),具有良好的体内外抗菌活性(MIC为0.25g/mL;对感染小鼠的保护率达60%);组方Ⅱ(金乌散)具有良好的体外抗菌活性(MIC为0.25g/mL),但无体内抗菌活性。采用剂量递增法测定了小鼠对秦公散灌服给药的最大耐受量。结果表明,秦公散水煎剂经口灌服的最大耐受量大于60000mg/kg·b·w,属于基本无毒者。 秦公散的稳定性和剂型研究采用加速试验和留样观察法研究了秦公散散剂的稳定性。结果表明,秦公散采用塑料袋包装,具有较高的稳定性,能够耐受一定强度的光照和温湿;在自然储存条件下不易变质,疗效稳定,保质期可达2年。开展了剂型改进研究,结果表明,药粉中添加30%的玉米粉就可将秦公散散剂研制成颗粒;秦公散颗粒的适口性较好,可直接饲喂奶牛,而且具有较高的稳定性,不易变质,但易受潮。 秦公散的药效学研究采用体表面积折算法,换算了秦公散的用药剂量;采用小鼠耳肿胀模型、大鼠足肿胀模型、小鼠肉芽肿模型、化学物所致小鼠腹腔炎症模型,研究了秦公散对急慢性炎症模型的影响;采用ELISA法测定了秦公散对内毒素血症小鼠血清中细胞间黏附分子1(ICAM-1)和可溶性E选择素(E-selectin)含量的影响;采用流式细胞术测定了秦公散及其含药血清对体外培养血管内皮细胞表达ICAM-1和E-selectin的影响;采用小鼠试验性乳房炎模型,观察了秦公散水煎剂灌服小鼠后对小鼠发炎乳腺病理变化的影响。实验结果表明,秦公散可显著抑制小鼠二甲苯所致耳壳肿胀,蛋清和甲醛所致的大鼠足趾肿胀,显著降低大鼠足趾组织中PGE2含量,显著抑制棉球所致小鼠肉芽肿,以及醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性升高;可显著降低内毒素血症小鼠血清中ICAM-1和E-selectin的含量,可显著抑制体外培养血管内皮细胞表达ICAM-1和E-selectin。表明秦公散对急慢性炎症均有较好的对对抗作用,尤其是对炎性血瘀具有良好的疗效;而且给小鼠灌服秦公散水煎剂后,能够显著降低乳腺的炎性损伤,缩短发炎乳腺的恢复时间。 秦公散的临床药理学研究选用呼和浩特周边地区具有典型乳房炎症状的奶牛,用秦公散进行治疗,观察了秦公散对临床型奶牛乳房炎的疗效。试验结果表明,秦公散对临床型奶牛乳房炎具有较好的疗效,有效率可达75%,效果与乳房内灌注环丙沙星相当。选用呼和浩特市蒙荷牧场的100头泌乳期高产奶牛,采用BMT法调查了其隐性乳房炎的发病率,并将阳性病例用秦公散进行了治疗。实验结果表明,该牧场隐性乳房炎的发病率为48%;给阳性病例用药5d后,各患病乳区乳中体细胞数显著下降,高剂量组乳区发病率由29%下降到8.3%,且强阳性乳区全部转阴,低剂量组乳区发病率由23%下降到10%,且强阳性乳区全部转阴;各乳样乳清中NAGase活力、LDH活力显著下降,表明秦公散能够有效减轻乳腺的炎性损伤,对于奶牛隐性乳房炎具有良好的治疗作用。


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