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猪星状病毒的分离鉴定和荧光定量PCR检测方法的建立

商晓桂  
【摘要】: 星状病毒(Astrovirus)属于人兽共患病病原,能感染人和猪、犬等多种动物,广泛分布于世界各地。本研究旨在调查上海地区某些养猪场星状病毒的感染情况,并建立一种快速、简便、高灵敏度的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法,为更好地预防猪星状病毒感染和传播提供依据。 通过对上海郊区某猪场疑似猪星状病毒感染猪的粪样进行病毒分离和纯化,获得一株能在PK-15细胞上增长繁殖,并使该细胞产生破碎、脱落等细胞病变的病毒,电镜观察结果显示,该病毒呈典型的星状结构,直径为28~30nm;初步证明所分离到的病毒为星状病毒。动物回归试验被攻毒猪都出现了星状病毒感染的临床症状;取感染猪肠内容物,经RT-PCR检测到猪星状病毒目的条带,结果表明,该猪场患病猪为星状病毒感染。 通过RT-PCR方法扩增猪星状病毒ORF2基因片段,将其作为标准模板建立标准曲线和熔解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性的验证试验。结果显示,所建立的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法灵敏度可达10个拷贝,是普通PCR检测方法的100倍,特异性和重复性较好,可用于猪星状病毒的检测,为猪星状病毒感染的调查及诊断提供了重要的技术支持。


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