牛乳中金黄色葡萄球菌生物被膜形成条件的研究

【摘要】： 试验对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)分离株进行16SrDNA序列比对分析,结果表明与模式菌株同源性达到98%。 建立并验证包括培养、定性、定量分析乳源金黄色葡萄球菌生物被膜的方法,扫描电镜法和银染法定性观察不锈钢片表面乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成情况,结果表明:乳源金黄色葡萄球培养12h后可形成成熟的生物被膜,银染法观察呈黑色片状或絮状,扫描电镜法观察隐约可见细菌之间有细丝状粘液物。超声波平板法定量测定培养1～7d后不锈钢表面形成的生物被膜活菌数可达105cfu/mL,且生物被膜活菌数在7d内基本保持稳定。 单因素试验和正交试验可知:超声波平板测定法剥离或去除乳源金黄色葡萄球菌生物被膜的最佳条件为:功率=100w,温度=35℃,时间=12min。建立响应面方差分析模型,结果表明:该模型显著(p0.05),模型确定系数R2= 0.9107,校正系数adj R2= 0.7172 ,模型与实际情况拟合较好。三个因素对超声波平板法剥离或去除经黄色葡萄球菌BF的影响效果依次为:功率时间温度。 研究形成条件对乳源金黄色葡萄球菌生物被膜生长的影响,结果表明:培养温度、外源糖分、氯化钠、与乳酸菌混合培养、营养液中浮游细菌含量、金属阳离子及其螯合剂(EDTA)等因素可对生物被膜生长产生影响。其中,接近金黄色葡萄球菌最适生长温度有利于其生物被膜的形成;外源糖分在特定的浓度下可对生物被膜的生长有微弱或较强的诱导作用,其中果糖与葡萄糖对乳源金黄色葡萄球菌生物被膜的生长影响极显著(P0.001);低浓度的氯化钠对生物被膜的生长有促进作用;嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)与金黄色葡萄球菌混合培养对BF有抑制作用;培养环境中浮游细菌数量与形成的生物被膜活菌数呈反比关系;金属阳离子及其螯合剂(EDTA)对乳源金黄色葡萄球菌BF影响结果表明:Ba~(2+)和Ca~(2+)对生物被膜的形成不产生显著影响;Mg~(2+)能够促进生物被膜的形成;Fe~(2+)对生物被膜的形成有诱导作用,但如果营养成分中极度缺少Fe~(2+)或Fe~(2+)浓度过高反而会抑制生物被膜的形成:EDTA具有可抑制或分散生物被膜形成的效应,二价金属阳离子对EDTA效应有阻断作用,阻断效果依次为:Fe~(2+) Ca~(2+)Mg~(2+) Ba~(2+)。