收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

蒙古绵羊β-防御素-1(sBD-1)基因真核表达载体的构建及其在牛胎儿成纤维细胞中的表达

钱英红  
【摘要】: β-防御素主要分布在脊椎动物的皮肤、黏膜等上皮组织,是防御素家族中的的重要成员,构成机体抵御微生物侵袭的第一道化学屏障,已被确认为是黏膜表面抗微生物屏障的组成成分。 为利用生物工程技术大量制备抗菌活性高、细胞毒性低的β-防御素,本研究以实验室保存质粒pMD19-TSinple-sBD-1为模板,利用合成的特异性引物,通过PCR方法扩增sBD-1基因,并将sBD-1基因重组到带有增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C1中,进行PCR鉴定。同时,采用脂质体转染法将构建正确的pEGFP-C1- sBD-1重组质粒转染牛胎儿成纤维细胞。转染成功后,应用实时荧光定量PCR技术检测sBD-1基因在牛胎儿成纤维细胞中的表达情况。 结果显示,经PCR扩增获得了300bp左右的产物。重组质粒载体经PCR鉴定和DNA序列测定,克隆的蒙古绵羊sBD-1基因序列与已发表序列的同源性为100 %,证明该载体构建完全正确,可以进行转染。转染细胞培养24h后,在荧光显微镜下可见大量的绿色荧光,证明构建的sBD-1基因表达载体能够在真核细胞中表达。应用实时荧光定量PCR技术进行检测,结果显示sBD-1基因在牛胎儿成纤维细胞中得以表达,这为利用基因工程大规模生产防御素奠定了基础。


知网文化
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978