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利用RNAi技术敲除拟南芥AtCDPK1和AtCDPK1α基因的研究

董婷婷  
【摘要】: 钙依赖蛋白激酶(CDPKs)是一个重要的蛋白激酶家族,在植物响应生物和非生物胁迫中起重要作用。拟南芥CDPKs家族中共有34个成员,其中AtCDPK1和AtCDPK1a高度同源。已有的研究结果表明,二者具有相似的功能。基于RNAi技术在基因功能研究中目的性强、周期短的特点,本文利用RNAi技术对AtCDPK1和AtCDPK1a基因进行沉默,并对获得的拟南芥转基因纯合体植株的沉默程度进行了检测,结果如下: 1、针对拟南芥AtCDPK1和AtCDPK1a基因构建了5个RNAi表达载体,其中共沉默RNAi表达载体3个、单一基因沉默的RNAi表达载体各1个。通过蘸花法将其分别转入野生型拟南芥Col-0,获得2个共沉默转基因纯合体和沉默了CDPK1a基因的转基因纯合体;尚有1个共沉默转基因株系和沉默了CDPK1基因的转基因株系已进入T2代筛选。 2、用半定量RT-PCR检测转基因纯合体植株中目的基因沉默程度的结果表明: (1)CDPK-a的6个株系中两个目的基因的沉默程度都很强。其中,转基因植株10-2的AtCDPK1和AtCDPK1a两个基因的沉默程度最强。 (2)CDPK-c的5个株系中AtCDPK1a的沉默程度比AtCDPK1强。其中,沉默程度最强的是转基因植株2-2。 (3)CDPK1a-2的9个株系中对目的基因AtCDPK1a的沉默程度都较强。其中株系29-4和36-5的沉默程度更强。 3、用半定量RT-PCR检测了转基因纯合体CDPK1a-2的基因沉默特异性,结果表明9个株系都有较高的沉默特异性。


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