重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体逆转慢性粒细胞白血病细胞对伊马替尼耐药的研究

【摘要】：目的:多药耐药性目前仍为导致髓系白血病化疗失败的主要原因。探讨重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rmh TNF-related apoptosis inducing ligand,商品名称:CPT)对人慢性粒细胞白血病骨髓细胞中Eph B4基因及Mcl-1基因的影响,并深入探讨CPT使慢性粒细胞白血病对伊马替尼耐药逆转的机制。方法:通过CML患者骨髓细胞中提取白血病单核细胞,继而从白血病单核细胞中提取目的基因Eph B4及Mcl-1。应用WB方法检测Eph B4及Mcl-1基因在CML患者骨髓细胞中的蛋白表达变化,应用CCK8法检测CML骨髓细胞对IM耐药性的变化,构建耐药K562-R细胞株裸鼠移植瘤模型,检测裸鼠体重变化及移植瘤体积变化,并对比经不同药物治疗的裸鼠生存时间。结果:与初治组细胞相比,耐IM的难治组细胞中Eph B4及Mcl-1蛋白过表达;难治组细胞对IM耐药性(IC_(50)=5.36±0.62mg/L)明显强于初治组细胞(IC_(50)=0.17±0.016mg/L)(P0.001)。经CPT处理后的难治-CPT组细胞中Eph B4及Mcl-1的蛋白表达明显低于未处理的难治组细胞,难治-CPT组细胞的IC_(50)值降低至1.27±0.16mg/L(P0.001)。IM+CPT组荷瘤鼠移植瘤的相对肿瘤体积(RTV)为4.17±0.54,显著低于IM组8.15±0.86(P0.05);IM+CPT组荷瘤鼠经12d后平均体重为22.95±0.09g,较d1时21.33±0.26g略有增加(P0.05),而IM组荷瘤鼠经12d后平均体重为20.65±0.20g,较d1时21.24±0.33g略有减少(P0.05);IM+CPT组裸鼠平均生存天数为19.33±2.05天,显著高于IM组裸鼠的平均生存天数13.33±1.25天(P0.05)。结论:CPT对慢性粒细胞白血病细胞的耐药存在逆转作用。其通过抑制Eph B4/Mcl-1通路,使IM治疗获得优势。