收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

复合生态制剂的前期研制及活菌菌苗的基因工程研究

易庆  
【摘要】: 创、烧伤感染一直是临床实践中一项十分重要的内容,每年都有大量的创 烧伤患者入院治疗。在长期的临床治疗中发现,决定预后的关键就在于能否有效 地控制创面感染。因为创面感染不仅会使创面加深而且会造成败血症的发生。由 烧伤引起的组织感染,往往给局部的微生物生长繁殖创造了良好的环境,加之局 部循环受到损害,影响了免疫因子和抗菌药物的进入,使针对全身感染的防治措 施难以收到理想效果。而外用抗菌素如银锌霜和磺胺类药物,长期使用后一方面 会对肝,肾产生毒性损害,引起白细胞减少症,另一方面,也会增加耐药性菌株, 因而不宜长期使用,更不会收到稳定的效果。另外对于一些长期难愈的病理性创 面,例如对于糖尿病性的溃疡创面,普通药物的深层给药受到很大局限且难以收 到良好的效果,而利用细菌活菌本身强有力的繁殖和迁徙能力,就可以在创面的 深层和夹缝部位发挥独特的作用,从而在某种程度上,减缓创面的进一步加深和 感染的扩散。 采用生物防治手段来控制创、烧伤感染是一种全新的治疗观念,不仅可以 避免上述外用药的副作用,而且在临床实践上的初步研究已收到了十分肯定的疗 效,这方面研究与开发已显示出极大的发展潜力。本研究即是在这种理论指导下 和结合临床治疗特点而着眼于研制一种用于外伤治疗的生态制剂。 本研究采用物理和中药复合诱变进而筛选出一株正常不致病的枯草杆菌— BS9920。该突变株较突变前对几种常见致病菌的抑制作用明显增强,而且对中 药的蒽醌成分产生了一定的耐受性。同时对它的生物学特性及部分分子生物学特 征进行了研究。 BS9920与此中药的有效提取成分配伍制成一新型活菌复合生态制剂,经大 量体外及动物创伤模型治疗研究证明,该复合制剂对外伤感染具有明显的治疗作 用,而且促进伤口的愈合,与同类制剂相比,在治疗及使用上都具有一定的优越 性。它的基本作用机理可归结为两方面:一方面,通过细菌本身的大量增殖,形 成一层生物保护膜来防止外来致病菌的侵袭,同时通过数量上的绝对优势,营养 争夺,形成占位性保护而起到生物拮抗作用:另一方面,中药提取的有效成分的 8庆:丛会生在瞩刑的的用研瞩及活囱卤菌的悠困工用研究 抗菌,消炎,生肌去腐的作用。复合制剂是通过两方面的协同增效来发挥作用的。 对制剂的比较系统的研究表明它在控制创面感染方而具有突出的疗效并独具特 色。安全及急性毒性实验表明,它在使用上是绝对安全可靠的,不会产生任何毒、 剔作*更不会诱发菌血症及远隔阶器的感染。这一新型复合制剂将有望成为一种 理想的创、烧伤治疗外用生态制剂。 为了进一步改善并增强该活菌复合制剂在外伤治疗中的作用,本研究对 BS9920进行了遗传性状上的改造。酋先,以枯草杆菌一大肠杆菌穿校质粒pHY07 及枯草杆菌分泌型质粒载体 pUS 86转化 BS9920感受态细胞,怨立一个比较稳 定的BS9920转化系统,并研究摸索出较佳的转化条件,在技术上为后面的工作 做好准备。 选择人表皮生长因子(功吹V‘)作为导入8s992o中的日的堆因。人表皮生 长因子(Human蜘ndrmal Growth l:uclor),也称尿抑拧素,足一类具有重要 应用价值的生长因子。hEGI;可刺激表皮细胞和多种细胞的生长,促进细胞的分 化。hEGF是一个含53个氨基酸,汉6kD大个的小肽 主要在十二指肠Bener 氏腺产生。木研究采用 PCR技术合成了人衷皮生长闲子基因(hEGF gN),经 DNA测序检验,证明合成的这一170hp左右的片段序列与已发衰的 hEGF’结构 基因序列完全一致。随后将其诠接至枯草杆茵分泌型表达约体仰S!86,构建载 体pUSE,并转化BS9920感受态细胞,经PCR快速鉴定及PCR·be-blot 的进一步检测,证明己获得阳性重组菌株B聊20T。采用*A广“I-标记)检恻 了 hEGF在 BS9920T中分泌表达水平,具体测定了细菌发酵培养上清液中 hEGF 的含量,证明培养上清中有一定水平的表达,但分泌的量不高。然而,在随后对 于BS9920T中分泌的h皿F的活性检测中发现,少蜜的BS9920T垮养上清液就 可在短时间内十分显著的促进人红白血病细胞K562的大显增殖和分化,K562 细胞增加了一个数缴级,证明BS9920 @株可分泌表达只有较强生物学活性的外 源hi{(}”迭岗。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 文慈华;轻微睑外伤感染所致多系统器官功能衰竭临床分析(附六例病例报告)[J];眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术);1991年04期
2 靳玉良,姜颖韶,李鑫,展昭新;自拟三黄水煎液换药治疗外伤感染21例[J];辽宁中医杂志;2004年12期
3 杨生民;;运用中医中药治疗大面积外伤感染[J];中医正骨;1987年04期
4 张淑卿;中药熏洗治疗大面积外伤感染的护理[J];医药论坛杂志;2003年16期
5 ;蒲公英在外伤感染的应用[J];中国医师进修杂志;1979年09期
6 张兴惠;0.6%碘酒体外封闭渗入疗法治疗疖痈[J];山东医药;1981年05期
7 宋月玲;外伤感染伤口细菌检测及抗生素耐药性分析[J];山东医药;2002年03期
8 何美恩;唐汉钧;;野芹菜红蓖麻治锈铁外伤[J];家庭医药;2008年11期
9 吴金水;“广楝散”治疗外科疾患5例[J];广西中医药;1987年05期
10 贾爱玲,吴春燕;再生Ⅰ号浸泡治疗糖尿病外伤感染9例[J];医学理论与实践;1999年07期
11 陈明川!571800;眼外伤感染并蝇蛆生长一例[J];眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术);2001年04期
12 ;如意金黄散治疗疖肿、外伤感染53例[J];人民军医;1974年04期
13 徐桂青,邱培亮;自拟金蒲苓浸泡液熏洗治疗外伤感染坏死[J];安徽中医临床杂志;1997年03期
14 刘秀芹;付桂云;;利福平胶囊外用治疗体会[J];黑龙江医学;1992年05期
15 黄友熊;施建英;;黄连液浸浴治疗指(趾)部化脓性感染[J];中国中西医结合杂志;1987年01期
16 邸建军,卢遥;“芦黄液”治疗急性乳腺炎及外伤感染[J];新疆中医药;1989年04期
17 康淑贞!277500,王红梅!277500,彭敏;对26例脚外伤感染患儿股部周径测量的护理体会[J];中国社区医师;1999年06期
18 ;枯草杆菌BF-7658α-淀粉酶高产菌株209的选育和投产[J];遗传学报;1976年03期
19 罗进贤,周桢林,胡晋新;双抗性质粒pSC33、pSC48的构建及其特性研究[J];中国生物化学与分子生物学报;1989年06期
20 胡长灯;詹卓玲;何尚浦;;三氯甲烷的致突变研究[J];中国公共卫生学报;1991年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 翟汇春;;肛周外伤感染一例报告[A];中西医结合肛肠病研究新进展[C];2000年
2 季红;吴正钧;陆孝义;;纤溶酶研究进展及以此为借鉴的乳源抗凝肽研究展望[A];中国奶业协会年会论文集2008(下册)[C];2008年
3 吴燕珍;;一例老年糖尿病病人合并外伤感染的营养治疗体会[A];中国营养学会第四届老年营养学术会议论文摘要汇编[C];1999年
4 陆兆新;;枯草杆菌溶纤酶的研究进展[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(下册)[C];2001年
5 起惠芹;;1例外伤感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的护理体会[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
6 宣劲松;翁曼丽;;枯草杆菌嘌呤操纵子5’调控区的PurBox结构[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
7 徐频;吴自荣;;枯草杆菌信号肽结构和功能的研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
8 高雪峰;黄旭日;孙家锺;;枯草杆菌的嘧啶核苷磷酸化酶活性位点的氨基酸在催化中的作用的QM/MM研究[A];中国化学会第九届全国量子化学学术会议暨庆祝徐光宪教授从教六十年论文摘要集[C];2005年
9 李祿先;陈必成;邱秀宝;;枯草杆菌S114体外蛋白酶的研究[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编(生物化学)[C];1964年
10 齐涵;胡玲美;李忠义;;应用诱导后的枯草杆菌抗大鼠烫伤创面金葡菌感染的实验研究[A];全国第三届烧伤外科学术交流会议论文摘要[C];1991年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 易庆;复合生态制剂的前期研制及活菌菌苗的基因工程研究[D];大连理工大学;2001年
2 卢亚萍;位置非特异性脂肪酶产生菌的筛选及脂肪酶基因的表达[D];南京农业大学;2010年
3 林峰;枯草杆菌生物素操纵子基因的克隆、序列改造及功能表达研究[D];西北农林科技大学;2003年
4 潘皎;短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的碱性蛋白酶基因的表达研究[D];四川大学;2004年
5 马吉胜;枯草杆菌脂肪酶的基因克隆、定向进化与非水酶学研究[D];吉林大学;2005年
6 刘战民;原果胶酶在毕赤酵母中的表达、发酵优化及酶学性质研究[D];南京农业大学;2005年
7 彭勇;豆豉溶栓酶的纯化及其基因的克隆与表达研究[D];四川大学;2002年
8 肖璐;溶栓酶基因的克隆及表达[D];四川大学;2005年
9 高柱虎;两种新型多功能纤溶酶的鉴定及其分子生物学特性研究[D];武汉大学;2004年
10 陈祥龙;色氨酰-tRNA合成酶结构与功能的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张燕;枯草杆菌响应缬氨酸,谷氨酸和谷氨酰胺的转录组研究[D];华东理工大学;2010年
2 卢龙娣;鸡源性益生芽孢杆菌的筛选鉴定、固体发酵的优化及其应用效果的研究[D];福建师范大学;2010年
3 刘建明;细菌纤维素外切酶基因的筛选及耐热纤维素酶基因在枯草杆菌系统里的表达[D];华东理工大学;2011年
4 李楠;硫(硒)代枯草杆菌蛋白酶水解活力的研究[D];吉林大学;2010年
5 张佳瑜;软化芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在毕赤酵母和枯草杆菌中的表达[D];江南大学;2010年
6 毛绍名;枯草杆菌β-甘露聚糖酶基因的克隆及表达[D];中南林业科技大学;2006年
7 李雁飞;多功能淀粉酶OPMA在枯草杆菌中的分泌表达与性质研究[D];吉林大学;2010年
8 张西锋;大肠杆菌枯草杆菌穿梭载体的构建及优化[D];西北农林科技大学;2004年
9 梁思宇;枯草杆菌溶纤酶高产菌株的选育及发酵条件的优化[D];南京农业大学;2000年
10 杨朝霞;枯草杆菌生物素操纵子基因的克隆与功能表达研究[D];西北农林科技大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 张陆龙 实习生 胡安娜;嵊州雅戈尔色织请“菌”治污[N];绍兴日报;2009年
2 本报记者 王伟;孜孜以求 精益求精[N];中国劳动保障报;2004年
3 ;应用纳米技术的抗菌产品在京面世[N];今日信息报;2004年
4 本报记者 魏刚 实习记者 李健玮;细菌变成存储器 信息也“传染”[N];北京科技报;2007年
5 ;龟颈溃疡病的防治[N];吉林农村报;2006年
6 赵彤;夏季腹泻的预防与治疗 (三)[N];中国劳动保障报;2005年
7 吕纪增;龟颈溃疡病防治[N];中国渔业报;2006年
8 李云;茶叶治牛病效果好[N];四川科技报;2005年
9 蒲昭和;“活蛆疗法”复辟[N];中国商报;2000年
10 吕乃群;鱼钩钩伤不可忽视[N];卫生与生活报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978