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梓醇对缺血损伤神经细胞的保护作用研究

汪卓  
【摘要】:本研究旨在探讨梓醇对缺血损伤神经细胞的保护作用及机制。 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cell line,PC12)是常用的神经生物和神经化学研究的细胞模型。本文以PC12细胞建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型,利用MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenylterazolium bromide)法检测了梓醇对缺血损伤的PC12细胞的保护效应;采用LBH(lactate dehydrogenase)法和荧光染色法,检测了梓醇对细胞膜的影响。结果表明梓醇对损伤细胞具有明显的保护活性,稳定了膜结构,保护细胞免受损伤。 应用生物化学方法,借助于紫外分光光度仪、荧光酶标仪和流式细胞技术,观察梓醇对PC12细胞缺血损伤抗氧化酶SOD(superoxide dismutase)、GSH-Px(glutachione peroxidase)和iNOS酶活性以及脂质过氧化物MDA(malondialdehyde)和ROS含量,线粒体膜电位,P53和Bcl-2蛋白,凋亡通路下游半胱氨酸酶-3(Caspase-3)状态的影响。结果显示,梓醇可明显提高SOD和GSH-Px酶活性,降低iNOS酶活性以及MDA和ROS含量,提高Bcl-2蛋白的表达和线粒体膜电位,抑制P53蛋白的表达和Caspase-3的活性,表明梓醇保护机制可能是提高内源性抗氧化酶活力,增加自由基清除,抑制自由基生成,降低自由基的含量,并通过抑制线粒体介导的细胞凋亡途径,虽口通过调节线粒体膜上Bcl-2和P53蛋白表达和线粒体膜电位来实现的。同时,梓醇抑制caspase-3的活化,从而抑制了PC12细胞的凋亡。 为了进一步说明梓醇对缺血诱导神经细胞的保护作用,本文采用了皮层神经元建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型,观察梓醇对皮层神经元细胞缺血损伤抗氧化酶SOD、GSH-Px和iNOS酶活性以及脂质过氧化物MDA的含量的影响。结果显示,梓醇可明显提高SOD和GSH-Px酶活性,降低MDA含量和iNOS酶活性,进一步说明梓醇对缺血诱导神经细胞的保护作用。


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