收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

梓醇对D-半乳糖衰老小鼠的神经保护作用研究

张秀丽  
【摘要】: 梓醇是玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosa Libosch)的主要成分,有保肝泻下,抗炎止痛,降血糖的功效。本实验室的前期研究证实:在细胞和动物模型上梓醇具有神经保护活性。然而梓醇是一种环烯醚萜类化合物,化学性质不稳定,分离工艺繁琐,来源有限,因此对现有工艺进行优化,对于梓醇的药理活性研究及产品开发具有现实意义。本研究旨在优化地黄中梓醇的提取纯化工艺,重点探讨梓醇在D-半乳糖致衰老小鼠模型中的神经保护作用及机制,主要研究内容与结果如下: 首先,将微波辅助提取与大孔吸附树脂柱层析技术相结合,对梓醇工艺进行了优化。 以高效液相色谱法为检测手段,考察冷浸、超声波辅助提取、微波辅助提取、热回流提取、索氏提取五种方法对梓醇提取率的影响。达到最大提取率时,微波辅助提取用时最短(4 min),说明微波辅助提取方法在提取效率上优于其它方法,综合评价选用微波辅助提取法进行梓醇的提取;考察九种不同极性大孔吸附树脂对梓醇的吸附性能,结果表明,D101树脂对梓醇的吸附量较大(76.1 mg/g干树脂),且对梓醇的解析率较高(92.1%)。该树脂对梓醇的吸附等温线符合Langmuir和Freundlich公式,为单分子层吸附,适于地黄醇提取液中梓醇的纯化。利用D101树脂层析柱,上样量为5 BV的地黄浓缩液(2 mg/ml),以水和不同浓度的乙醇洗脱。收集含梓醇的5%乙醇洗脱液,浓缩干燥后,得到梓醇含量大于50%的褐色粉末,将其进行硅胶柱层析,氯仿:甲醇(8∶2)梯度洗脱得到梓醇单体,纯度达90%以上,得率为600 mg/kg药材。 其次,建立皮下注射D-半乳糖致衰老小鼠模型,研究梓醇的神经保护作用及机制。 (1)利用旷场、跳台和Morris水迷宫,考察梓醇对D-半乳糖衰老模型小鼠认知能力的影响,发现D-半乳糖致衰老小鼠的自主活动和探究能力,被动学习记忆和空间认知能力下降,应用梓醇治疗两周后,明显改善衰老小鼠的学习记忆能力。病理切片苏木素-伊红(HE)染色发现D-半乳糖衰老小鼠神经元细胞稀疏,细胞核固缩;生化方法检测到大脑皮层和海马内胆碱酯酶(AChE)活力上升,免疫组织化学方法发现基底前脑乙酰胆碱转移酶(ChAT)表达量减少,免疫印迹方法发现脑组织乙酰胆碱M受体(mAChR)表达量降低。应用梓醇后,不仅能够减轻D-半乳糖所致的小鼠大脑病理损伤,而且通过抑制AChE的活力,提高ChAT和mAChR表达来保护乙酰胆碱系统,进而维持神经递质乙酰胆碱(Ach)的含量,改善模型小鼠的学习记忆能力。 (2)梓醇对D-半乳糖衰老模型小鼠体内抗氧化能力的研究表明:梓醇能显著提高大脑皮层、海马、肝和脾组织内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽-S-转移酶(GSH-ST)活力,降低脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量。提示梓醇对衰老模型小鼠具有保护作用,其保护机制之一是提高机体内源性抗氧化酶活力,减轻脂质过氧化程度,保护机体免受氧化损伤。通过相关性分析,发现小鼠大脑皮层、海马内SOD和GSH-Px活力与小鼠水迷宫实验第五天逃避潜伏期呈负相关,MDA水平与第五天逃避潜伏期呈显著正相关,表明梓醇改善模型小鼠学习记忆能力可能与其提高大脑抗氧化能力有关。 (3)考察梓醇对D-半乳糖衰老模型小鼠大脑能量代谢的影响,发现梓醇能够降低模型小鼠大脑皮层和海马组织乳酸脱氢酶(LDH)活力,提高肌酸激酶(CK)、Na~+-K~+-ATP和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活力;梓醇治疗组小鼠大脑皮层和海马线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅱ/Ⅲ、Ⅳ活性明显高于D-半乳糖衰老模型小鼠,梓醇不仅抑制线粒体活性氧(ROS)的产生和线粒体膜电位(MMP)的降低,而且抑制衰老小鼠皮层和海马细胞的凋亡,提高抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制凋亡通路关键蛋白caspase-3的活性。这说明梓醇可通过提高线粒体呼吸链复合酶的活性,抑制线粒体ROS的产生,阻止MMP的丧失,上调Bcl-2蛋白的表达及拮抗caspase-3的激活,从而保持线粒体功能的完整性,进而抑制氧化应激所致的细胞凋亡同时上调能量代谢相关酶的活力,保护脑组织能量代谢的平衡来发挥其抗衰老作用。 总之,本研究表明梓醇为地黄中主要的抗衰老活性成份之一,有可能在延缓衰老和与衰老相关的神经退行性疾病的预防和治疗中发挥作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 蔡永春,李凤文,张立石,刘红,潘静华,贾肖元;补肾怯痰活血方对衰老小鼠学习记忆功能的影响[J];实验动物科学与管理;1998年03期
2 杨宇,李友元,胡信群,彭孝立;衰老小鼠端粒酶活性的测定及意义[J];中国老年学杂志;2002年04期
3 包照日格图,胡雅儿,夏宗勤,易宁育;4种滋阴中药对衰老小鼠脑M受体的影响[J];中国老年学杂志;2005年07期
4 张海仙;王进;;益气健脾法与益气健脾活血祛痰法对D-半乳糖衰老小鼠自由基影响的实验研究[J];世界中西医结合杂志;2008年10期
5 李欣;丁树哲;卢健;;耐力训练对衰老小鼠心肌Akt/mTOR信号通路的影响[J];中国运动医学杂志;2010年01期
6 杨占军;张健;汤阳;温鲁;;蛹虫草对D-半乳糖模型鼠记忆能力的影响[J];食品科学;2010年11期
7 唐纯青;于蕾妍;张丽;高玲;王清吉;;低剂量复合螺旋藻多糖抗衰老作用研究[J];安徽农业科学;2010年20期
8 王志红;郭坤元;邓兰;曲佳;杨理婷;;骨髓间充质干细胞移植减轻衰老大鼠肠损伤[J];基础医学与临床;2011年09期
9 刘晓冬,李质馨,窦肇华,鲁质博,徐冶,贺小舟;胎脑提取液对衰老小鼠肾脏组织结构及脂褐素含量的影响[J];解剖科学进展;1999年04期
10 粟坤,曲凤玉,魏晓东,李春江,徐中福;细辛、杜仲及其合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠心、肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响[J];黑龙江医药科学;1999年04期
11 杨新宇,王建光,李新成,张涛,白书阁;不同剂量大枣对D-半乳糖衰老小鼠SOD活性和MDA含量影响的实验研究[J];黑龙江医药科学;2001年02期
12 刘东璞,齐亚灵,赵文杰,刘晓梅,王景霞,李文;杜仲对D-半乳糖所致衰老小鼠睾丸的形态学研究[J];局解手术学杂志;2002年03期
13 成文利;江振友;王修银;潘竞锵;董军;邝少松;铙子亮;;四君子汤及拆方对D-半乳糖诱导衰老小鼠学习记忆调节作用的影响[J];中药材;2008年07期
14 王虹;刘敏;顾建祥;顾建勇;;迷迭香酸对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的研究[J];中国老年学杂志;2009年05期
15 梁妍;叶兰;郝小燕;官志忠;罗俊;;天参益智胶囊对D-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响[J];时珍国医国药;2009年08期
16 李会;;大蒜素对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆调节作用[J];四川动物;2010年05期
17 Pradhan SN;史久华;;中枢神经介质和衰老[J];国外医学.老年医学分册;1981年04期
18 程秀娟;邸琳;韩大庆;张艳秋;刘永强;;人参、人参茎叶皂甙和参杞安泰抗衰老作用的比较研究[J];中国老年学杂志;1992年01期
19 李质馨,窦肇华,文天秀,贺小舟,刘晓冬;胎脑提取液对衰老小鼠海马神经元酸性磷酸酶活性影响的实验研究[J];解剖科学进展;1999年04期
20 栗坤,郑福禄,张明远,魏晓东;细辛、杜仲及其合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠血液中过氧化氢酶活性的影响[J];黑龙江医药科学;2000年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 沈健;陈增良;余禹达;冯磊;;茶多糖对提高衰老小鼠抗氧化和免疫作用的研究[A];膳食变迁对民众健康的影响:挑战与应对——第二届两岸四地营养改善学术会议学术报告及论文摘要汇编[C];2010年
2 吕锦芳;司阳洋;陈彩云;赵凯;;何首乌对D-半乳糖致衰老小鼠器官指数的影响[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
3 张片红;唐沪强;郑鸣之;陈莹莹;沈岳良;;杭白菊总黄酮对衰老小鼠学习记忆的影响[A];2011年浙江省肠外肠内营养学学术年会论文汇编[C];2011年
4 沈健;鲍淑静;冯磊;;金匮肾气丸加微营养素对衰老小鼠雄激素影响[A];膳食变迁对民众健康的影响:挑战与应对——第二届两岸四地营养改善学术会议学术报告及论文摘要汇编[C];2010年
5 张片红;唐沪强;郑鸣之;陈莹莹;沈岳良;;杭白菊总黄酮对衰老小鼠学习记忆的影响[A];第13届全国临床营养学术会议资料汇编[C];2011年
6 雷燕;杨静;赵浩;杜雪君;刘建刚;陈可冀;;人参三七川芎提取物延缓衰老小鼠血管老化的实验研究[A];第十次中国中西医结合学会心血管病学术大会暨第五次江西省中西医结合学会心血管病学术大会论文汇编[C];2010年
7 吕锦芳;宁康健;丁小燕;张军;;何首乌对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的研究[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
8 陈雪;易有金;刘静;王鑫;;不同发酵类型茶叶对D-半乳糖衰老小鼠抗氧化作用的影响[A];营养与老年代谢病——达能营养中心第十四届学术年会论文集[C];2011年
9 孙云;徐峰;杨轩璇;王德俊;张洪泉;;肉苁蓉多糖对衰老小鼠肺组织细胞凋亡及一氧化氮含量的影响[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
10 孙云;徐峰;杨轩璇;王德俊;张洪泉;;肉苁蓉多糖对衰老小鼠肺组织细胞凋亡及一氧化氮含量的影响[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第二部分)[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴立蓉;益寿丸延衰益智作用的机理研究[D];广州中医药大学;2010年
2 段文明(DOAN VAN MINH);玉郎伞多糖抗衰老作用及机制研究[D];广西医科大学;2014年
3 裴媛;独活及其醇提物延缓自然衰老小鼠脑老化的实验研究[D];辽宁中医学院;2005年
4 姚振宇;熟地黄提取物对衰老小鼠行为学及大脑退行性病变的影响及机制[D];湖北中医学院;2009年
5 张秀丽;梓醇对D-半乳糖衰老小鼠的神经保护作用研究[D];大连理工大学;2008年
6 冯仁田;衰老的免疫学研究:自然衰老的免疫系统变化和氧化应激对免疫系统的影响[D];中国协和医科大学;2000年
7 马丽杰;锁阳多糖延缓衰老的作用及端粒酶调控机制研究[D];内蒙古大学;2009年
8 龚玉石;莲房原花青素对老年性痴呆的防治作用及其机制的研究[D];华中农业大学;2009年
9 赵利华;艾炷灸延缓D-半乳糖小鼠脑衰老作用的研究[D];广州中医药大学;2009年
10 宋旭;非酶糖基化致衰老理论的实验研究[D];中国协和医科大学;1999年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张磊;骨髓间充质干细胞对自然衰老小鼠T细胞的调节作用研究[D];北京协和医学院;2011年
2 梁颖敏;铁皮石斛对雌性衰老小鼠的抗衰老作用及其机理研究[D];广州中医药大学;2011年
3 陆碧琼;不同负荷间歇游泳运动对衰老小鼠自由基代谢及抗氧化酶活性影响的研究[D];河南大学;2012年
4 黄和贤;D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力和睾丸的改变及延衰合剂的治疗作用研究[D];重庆医科大学;2011年
5 杜明洋;美金刚联合丰富环境对快速衰老小鼠学习记忆能力及突触可塑性相关蛋白的影响[D];南京医科大学;2013年
6 栾增强;延衰合剂对衰老小鼠抗氧化及学习记忆能力影响的研究[D];重庆医科大学;2011年
7 石兵兵;血清微环境对自然衰老小鼠T细胞的调节作用研究[D];北京协和医学院;2011年
8 邵海鸿;针刺足三里对衰老小鼠端粒酶活性及皮肤组织结构的影响[D];南京中医药大学;2013年
9 郭晶晶;耐力运动对衰老小鼠骨骼肌线粒体功能和自噬相关基因影响的研究[D];天津体育学院;2013年
10 揣国钢;开窍益智方对亚急性衰老小鼠学习记忆功能的影响[D];扬州大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 ;缺锌对衰老小鼠抗氧化系统和肝脏DNA损伤修复功能的影响[N];中国医药报;2003年
2 张中桥;红景天提取物具有抗衰老作用[N];中国医药报;2006年
3 张中桥;红景天提取物诺迪康胶囊具有抗衰老作用[N];中国中医药报;2006年
4 付于 于建春;天津中医学院在分子水平发现针刺延缓衰老作用机制[N];中国医药报;2006年
5 王忠;谷顺才;韩艳丽等;芦荟抗衰老机理揭密[N];中国医药报;2004年
6 赵玉华;六味地黄丸抗衰老作用浅析[N];中国医药报;2002年
7 程书权;2000年我国生化药物研究进展[N];中国医药报;2001年
8 苗明三;顾丽亚;实验研究显示:芦笋多糖有抗衰老作用[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978