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发酵性丝孢酵母脂肪酶与蛋白酶发酵及性质的比较

王迪  
【摘要】:本文利用发酵性丝孢酵母制备脂肪酶,对脂肪酶的部分发酵条件和性质,以及同源蛋白酶对脂肪酶合成的影响进行研究,以提高脂肪酶的生成能力和催化活性。研究结果如下: 发酵性丝孢酵母所产脂肪酶为胞内酶。利用超声波破碎细胞提取脂肪酶的适宜条件为:超声波输出功率550W,每次辐射时间6s(间歇时间5s),工作总时间5.5min,菌体浓度25g/L,此条件下提取的脂肪酶活力达128.46U/g。利用超声波进行细胞透性化的适宜条件为:超声波输出功率180W,每次辐射时间2s(间歇时间5s),工作总时间1.2min,菌体浓度40g/L,此条件下细胞通透性可明显改善,透性化细胞脂肪酶表现出较高活力。 发酵产脂肪酶和蛋白酶的种子培养基葡萄糖最适浓度为80g/L。发酵至60h,蛋白酶活性达到最大值308.8U/g,发酵至72h,脂肪酶活性达到最大值96U/g。 超声波处理所得粗酶液的脂肪酶最适作用条件为55℃、pH6.8;蛋白酶最适作用条件为55℃、pH7.0;两种酶在20-40℃、pH5-6时皆维持稳定。脂肪酶和蛋白酶于-20℃贮存3d可分别维持80%和100%的相对活性。金属离子(5mmol/L) Mg2+、Ca2+、Zn2+Mn2+、Cu2+对脂肪酶均产生抑制作用,而Ca2+、Mn2+能够激活蛋白酶。正己烷对脂肪酶具有明显的激活作用,而完全抑制蛋白酶。0.01%(v/v) Triton-100对脂肪酶和蛋白酶均具有激活作用,使两种酶活性分别提高了112.19%和23.03%。7.5%(w/v)蔗糖对脂肪酶和蛋白酶均具有保护作用。0.5%(w/v)可溶性淀粉和1%-2.5%(w/v)的酪蛋白能够有效保护脂肪酶的活性而不利于蛋白酶的贮存。


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