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冬虫夏草多糖的提取及生物活性研究

郎久义  
【摘要】:冬虫夏草是一种珍贵的药用真菌,具有许多疗效。但是天然冬虫夏草十分稀少,因此采用深层发酵法大规模生产冬虫夏草菌丝体并提取一些有效成分具有十分重要的意义。本论文对冬虫夏草深层发酵技术、冬虫夏草多糖提取及生物活性进行了初步的研究。 通过筛选得到冬虫夏草菌株的固体培养条件,以菌丝体湿重和胞外多糖得率为指标,选择出冬虫夏草菌发酵的最适种子培养基、发酵培养基和最佳培养条件。冬虫夏草菌最佳液体种子培养基为:3%葡萄糖,1%蛋白胨,0.4%KH2PO4,0.2%MgSO4;冬虫夏草发酵的最优培养基为:3%葡萄糖,2%豆粕,0.4%KH2PO4,1.0%酵母膏;最优培养条件为:10%接种量,摇床转速140r/min,24℃,pH7.0。经优化培养后冬虫夏草菌的菌丝体湿重和多糖得率比优化前明显提高,分别为102g/L和7.45g/L。 为提高冬虫夏草菌有效成分多糖的得率,对冬虫夏草菌胞内、胞外多糖的提取、分离、纯化条件进行了优化选择。研究结果表明,乙醇沉淀胞外多糖优化条件为:沉淀温度-15℃,沉淀时间24h,沉淀pH7.0;热水浸提胞内多糖的优化条件为:浸提温度85℃,浸提时间2h,浸提加水比50:1,浸提pH7.0,浸提两次,Sevag法脱去蛋白。 免疫实验表明冬虫夏草多糖能提高动物的免疫力,小鼠灌胃不同剂量的多糖其免疫效果不同。在剂量(200mg/㎏·d)时胞内不去蛋白的多糖对小鼠的肝脏、脾脏、增殖百分率、吞噬指数、IL-2、IFN-γ都有显著提高,与对照组比较分别增为1.22倍、1.32倍、1.78倍、1.27倍、1.29倍、1.27倍。经SephadexG-100分离粗多糖后,用三个吸收峰收集液灌胃小鼠,做免疫实验与对照组比较无显著差异,结果表明冬虫夏草胞内粗多糖不去蛋白对小鼠的免疫促进作用最好。


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