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大肠杆菌苯丙氨酸代谢途径的分子改造

马蓉  
【摘要】:为了保证粮食安全,国家必须贮存相当数量的粮食和种子,由此产生了陈化粮。对陈化粮进行深加工,提升其附加值具有重大的经济和社会效益。陈化粮的主要成分是淀粉,经简单工艺加工便可制成葡萄糖,充分利用陈化粮中的淀粉为原料生产葡萄糖并联产苯丙氨酸可以较好地提高陈化粮的效益。 在大肠杆菌(Escherichia coli)整个芳香族氨基酸生物合成途径中,aroG和pheA是苯丙氨酸代谢途径的两个重要基因,aroG编码脱氧阿拉伯糖型庚酮糖磷酸合酶(DS),pheA编码一个双功能酶,它同时催化两步关键反应,具有分枝酸变位酶(CM)和预苯酸脱水(PD)两种功能。AroG和PheA是苯丙氨酸代谢的两个重要调控点,是整个通路的瓶颈,酶的活性受反馈抑制调控,酶的表达受反馈阻遏调控。本研究将抗芳香族氨基酸反馈抑制菌株ATCC31884的aroG~(fbr)和pheAfbr克隆到pQLinkH质粒上,并通过LIC技术构建了ppsA、tktA、yddG、aroG~(fbr)四基因共表达质粒,PpsA、tktA、yddG、aroG~(fbr)、pheAfbr五基因共表达质粒,aroG~(fbr)、pheAfbr二基因共表达质粒,aroG~(fbr)、pheAfbr、yddG三基因共表达质粒(ppsA、tktA、yddG基因为本研究小组其他成员克隆)。 在大肠杆菌芳香族氨基酸分支途径中,分支酸作为枢纽物质将碳流分为两条支路,一条支路在邻氨基苯甲酸合成酶TrpE的作用下生成色氨酸;另一条支路则经分支酸变位酶催化生成酪氨酸和苯丙氨酸。本研究利用Red重组技术对抗芳香族氨基酸反馈抑制的菌株ATCC31884进行了trpE基因的敲除,去除了色氨酸支路对碳代谢流的竞争。 本研究在增加前体物供应及苯丙氨酸外向转运的基础上,加强共同途径及分支途径,增加苯丙氨酸合成通路代谢流、突破限速反应,同时去除竞争碳代谢流支路,将构建的不同组合的共表达质粒在去除色氨酸支路的ATCC31884中进行表达,以期筛选出苯丙氨酸高产菌株,为构建更高效L-苯丙氨酸工程菌奠定了基础。本研究小组利用基因克隆、基因共表达和基因敲除等技术,建立了一个较为完善的微生物基因操作平台,该平台为将大肠杆菌改造成为更多高附加值产品的生物反应器提供了技术支持。


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1 记者  陈超;大肠杆菌有望制成生物微型马达[N];科技日报;2006年
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3 沧州河间市畜牧水产局 程红利;一例肉鸡类巴氏杆菌和大肠杆菌混感的诊治[N];河北农民报;2011年
4 ;杆菌速灭[N];中国畜牧水产报;2001年
5 陈勇;菠菜生菜相继被“毒”,灌溉水是“凶嫌”[N];新华每日电讯;2006年
6 编译 王金元;新型相机用大肠杆菌做底片[N];北京科技报;2005年
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8 冯立中;致泻大肠杆菌是腹泻病祸首[N];健康报;2006年
9 宁夏隆德县畜牧兽医站 罗志轶;中西医治疗獭兔球虫和大肠杆菌混合感染[N];江苏农业科技报;2007年
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