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软枣猕猴桃中生物碱的提取纯化及生物活性研究

刘旸旸  
【摘要】:软枣猕猴桃(Actinidia arguta (Sieb.et Zucc.))为猕猴桃科、猕猴桃属多年生落叶藤本植物,又称软枣子、猕猴梨、藤梨。主要分布于我国华北、东北、西北、山东及长江流域,我国东北南部山区,长白山山脉的野生软枣猕猴桃资源尤其丰富。成熟软枣猕猴桃果实如枣般大小,表皮光滑无毛,甜酸比适中,有独特的风味。作为天然的野果资源,不仅果实富含各种营养元素,还具有多种功能性物质,具有医疗保健功效。古籍中记载,软枣猕猴桃的果实、根、茎、叶均可入药,具有滋补强身、生津润肺等功效,对心绞痛、高血压、高血脂等疾病具有一定的疗效,是理想的绿色食品和食疗食品。生物碱在植物中分布广泛,是传统中药材中的主要活性成分之一,具有抗菌、消炎、止痛、抗疟等作用。目前软枣猕猴桃中所含生物碱的数量、种类及其功能尚不明确,国内外未见对软枣猕猴桃所含生物碱的系统研究报道。对其进行深入系统的研究,可为软枣猕猴桃的开发利用提供科学依据。本文对软枣猕猴桃所含生物碱的提取、纯化、组成成分及生物活性进行了系统研究。研究结果如下:1.通过对软枣猕猴桃生物碱提取液的试管沉淀分析,确定软枣猕猴桃根、茎、叶、果实中均含有生物碱。2.建立了软枣猕猴桃生物碱含量测定方法:采用酸性染料比色法,以乌头碱为标准品;缓冲液最适pH值7.5,最佳用量为6 mL;溴麝香草酚蓝显色剂最佳用量为2 mL;用紫外分光光度计在415 nm处测定吸光度。测得软枣猕猴桃根中生物碱的含量最高,叶中生物碱含量最低。3.通过单因素和正交试验得出提取软枣猕猴桃生物碱的最佳工艺条件。具体条件为:乙醇溶液浓度60%,料液比1:25 g/mL,超声功率200 W,超声时间15 min,此条件下进行2次提取,生物碱的得率为0.683 mg/g。4.大孔吸附树脂D-101纯化软枣猕猴桃生物碱最佳的工艺条件为:上样液的浓度为0.4 mg/mL,上样液pH值为10,上样液量为3 BV,用3 BV的蒸馏水冲洗树脂柱,流速为2 mL/min,3.4 BV的80%乙醇溶液以2 mL/min的速率洗脱,纯化后软枣猕猴桃生物碱平均回收率可达90.9%,平均纯度为77.6%。5.应用高效液相色谱(HPLC)和高效液相质谱(LC-MS)对软枣猕猴桃中生物碱的纯化产物进行分析,确定软枣猕猴桃中生物碱主要为:乌头碱、小檗碱、延胡索碱、延胡索乙素、次乌头原碱、扁豆素、阿托品、猕猴桃碱等生物碱。6.对软枣猕猴桃生物碱体外抗氧化活性进行了研究。与Vc相比,软枣猕猴桃生物碱清除DPPH自由基能力和抗脂质体过氧化能力好于Vc。软枣猕猴桃生物碱对超氧阴离子自由基和羟基自由基有一定的清除作用,但明显差于Vc。软枣猕猴桃生物碱对Fe3+具有较好的还原作用,但还原能力稍差于Vc。结果表明,软枣猕猴桃生物碱具有一定的体外抗氧化活性。7.对软枣猕猴桃生物碱的免疫活性进行了研究。软枣猕猴桃生物碱可以提高小鼠的脾脏、胸腺和肝脏指数;增强小鼠单核巨噬细胞的吞噬能力;提高小鼠的白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)和血清溶菌酶(LSZ)指标;提升小鼠肝脏中谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH+Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性。结果表明,软枣猕猴桃生物碱具有良好的免疫活性。8.对软枣猕猴桃生物碱抗疲劳和提高运动能力作用进行了系统研究。软枣猕猴桃生物碱能够显著提高小鼠的负重游泳时间和前肢握力;能够提高运动后小鼠的血糖值、白蛋白(Albumin)和血清总蛋白(TP)水平,同时降低血清乳酸、血浆氨、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、总胆红素(TBIL)、尿酸(UA)和尿素氮(BUN)的水平;提高肝糖原和肌糖原含量;对小鼠的肌肉组织不产生伤害。结果表明,软枣猕猴桃生物碱对抗疲劳和提高运动能力具有很好的效果。


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