延边苹果梨分类地位及其授粉受精特性的研究

【摘要】：苹果梨是我国寒地主栽的梨品种,但关于其分类地位问题一直存有异议。为此,我们于2000-2003 年用白梨系统、砂梨系统、秋子梨系统、西洋梨系统的代表品种及其杂交种以及苹果梨的芽变、杂交品种为试材,通过RAPD 分子标记、过氧化物酶同工酶分析以及孢粉学鉴定等手段,经过聚类分析等统计处理,对苹果梨及梨属主栽品种的亲缘关系与分类问题进行了系统研究。其次,延边苹果梨园很少有授粉树,必须进行人工授粉。花粉的质量和授粉技术将直接影响坐果率,如何保证花粉质量和数量以及研究与苹果梨坐果密切相关的授粉受精过程,是生产上亟待解决的问题。为此我们对苹果梨人工授粉用花粉的大量采集、运输及贮藏技术和授粉受精特性进行了研究。主要研究结果如下: 1. 建立了梨树RAPD 优化反应体系,即25μL 反应体系中含有Tris-HCl(pH9.0)10mmol/L、KCl 50 mmol/L、MgCl2 2.0 mmol/L、dNTP200μmol/L 、模板DNA10ng、引物10pmol、Taq DNA 聚合酶1.5U。适宜扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性1 min,37℃退火1 min,72℃延伸2 min,5个循环;94℃变性0.5 min,37℃退火1 min,72℃延伸2 min,45 个循环;72℃延伸10 min。 2. 对供试的40 个梨品种及类型进行RAPD 分析,从100 个10nt 随机引物中筛选出12 个多态性引物用于正式扩增,共扩增出146 条DNA 带,其中多态性DNA 带141 条,占96.6%,平均每个引物扩增的DNA 带数目为12.2 条。有24 个品种及类型扩增出了1 个以上的特有RAPD 标记,据此可以进行品种鉴定或早期性状预选。 3. 利用DNA 扩增结果进行聚类分析,把供试的40 个品种及类型分为7 类。RAPD 技术能将起源于欧洲的西洋梨与起源于中国的3 个种明显区分开,起源于中国的3 个种虽没有完全各自聚类,但各材料之间都有不同的遗传距离,证明RAPD 技术可作为梨种质分类鉴定的依据。 4. 苹果梨与白梨系统的代表品种鸭梨、栖霞大香水等聚类在一起,而与砂