嘧肽霉素抗烟草花叶病毒（TMV）作用机制研究

【摘要】：嘧肽霉素是由链霉菌产生的新型抗病毒农用抗生素,对烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)引起的植物病毒病害有很好的防治效果。本文采用生理生化及分子生物学等手段对嘧肽霉素抗TMV的作用机制进行了深入研究,结果如下: 1、根据嘧肽霉素理化性质和已摸索的分离纯化条件,筛选了一套适合于该抗生素的、经济实用的分离纯化工艺。用吸附法、离子交换法及薄层层析法获得了嘧肽霉素的纯品。本文选用嘧肽霉素的纯品及其制剂进行抗病毒作用机制的研究。 2、嘧肽霉素对不同寄主上由TMV引起的病毒病害具有很好的防治效果。嘧肽霉素对烟草花叶病毒病害防治效果最好,该药剂对TMV具有较强的体外抑制作用,枯斑抑制率达96.2%;对寄主有一定的保护和治疗作用,枯斑抑制率分别为80.4%和39.7%。对TMV引起的辣椒、番茄花叶病毒病害也具有很好的防治效果,可延缓症状出现、减轻发病程度。另外,嘧肽霉素能降低植株体内TMV的浓度,接种前24h喷施嘧肽霉素处理的效果好于接种后24h喷药处理的,药剂与病毒混合1h后再接种的效果最好,抑制率高达96%。 3、嘧肽霉素对TMV粒体具有较强的体外抑制作用和一定的体内抑制作用,抑制率分别为92.1%和32.8%。体外抑制作用在测定的时间段内随着作用时间的增加而增强,并且不能通过稀释药剂来恢复病毒粒子的侵染能力。在电镜下观察,与药剂混合不同时间的病毒粒体结构受到了不同程度的破坏,病毒粒体出现断裂现象。另外药剂与病毒粒体混合液的紫外吸收光谱也发生了很大的变化,出现了没有规律的峰值,这些试验结果都充分说明嘧肽霉素对TMV具有很强的抑制作用。 4、采用生物学,同位素示踪和定量竞争—PCR三种方法系统地研究了嘧肽霉素对TMV—RNA的影响。试验结果表明,嘧肽霉素对离体TMV—RNA具有很强的降解作用,嘧肽霉素处理TMV—RNA后接种心叶烟,平均枯斑抑制率为92.6%;利用~3H—尿苷作为标记物结合放射性免疫分析法研究了嘧肽霉素对烟草花叶病毒RNA合成的影响,结果表明,嘧肽霉素可以抑