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凯地菌素的纯化、结构测定及作用机理研究

姜云  
【摘要】:针对本研究室前期自主研发的凯地菌素,从菌种培养基的筛选、分离提纯、理化性质、结构分析及抑菌机理等方面对其进行了更为系统的研究。结果如下: 1、对凯地菌素产生菌进行了菌种斜面培养基的筛选,获得了最佳培养基为:大豆粉20g,酵母粉3g,CaCO_30.4g,KNO_31g,K_2HPO_40.5g,MgSO_40.5g,NaCl 0.5g,FeSO_40.01g,葡萄糖1g,琼脂20g,水1000ml,pH7.0。在此培养基上生长的菌株,菌层厚、产孢快、生长周期短,适合作为菌种保存的培养基。 2、进行了凯地菌素分离提纯技术的研究,利用此技术得到了纯度很高的凯地菌素纯品。分离提纯技术如下:发酵液的预处理;预处理的发酵液,按发酵液:正丁醇:氯仿(2:1:1)的比例进行二次萃取;萃取浓缩液上样于极性大孔网状树脂,先用无离子水进行洗脱,再用无水乙醇进行洗脱得到浓缩液;浓缩液上样于弱极性大孔网状树脂,用80%乙醇进行洗脱得到浓缩液;浓缩液上样于硅胶层析柱,用氯仿:乙醇:水:正丁醇(2:3:1:0.5)进行洗脱,收集活性液冷冻干燥得到粗品;将粗品点样于硅胶GF254薄板上,在氯仿:乙醇:水:正丁醇(2:3:1:0.5)的展层剂中展层,得到活性液;将活性液进行二次冷冻干燥得到淡黄色片状纯品,通过液相色谱仪测得提取的凯地菌素纯度为95.80%。 3、研究明确了凯地菌素的理化性质。凯地菌素属中等极性的、中性抗生素,极性纸层析结果与多烯类抗生素的纸层析结果相似:易溶于水、吡啶,微溶于甲醇、乙醇、正丁醇,不溶于乙酸乙酯、丙酮、苯、三氯化碳;对高温、光照和紫外处理有很好的稳定性;官能团反应试验结果发现,凯地菌素可能含有糖苷键、氨基酸伯氨基和醛基,不含有还原糖、多肽和酚基,高锰酸钾、浓硫酸反应与多烯大环内酯类抗生素的特性相似;并且依据纯品,采用生物法和分光光度法对摇床发酵液进行了效价的测定。 4、研究明确了凯地菌素的化学结构。通过紫外吸收光谱测定,凯地菌素属于四烯类抗生素,结构中应存在四个共轭双键;红外光谱结果表明:凯地菌素存在—OH、—NH_2、C=C、—CH_3、—C=O、C—O—C、—COOR


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