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半滑舌鳎DKKL-1基因的克隆与表达分析

修旺珊  
【摘要】:近年来,随着我国海水鱼类养殖业的不断发展,广大渔业工作者致力于高价值、高营养的优良新品种的开发研究,尤其在我国北方新品种的研究主要集中在比目鱼类方面。半滑舌鳎生长速度快、食性温和、出肉率高且肉质鲜美,市场价值极高,同时是目前发现的雌雄生长差异最大的鱼类之一。半滑舌鳎又是一种存在天然性逆转现象的雌雄异体鱼类,且性别决定类型为ZW型。鱼类性别相关基因及性别决定分子机制的研究是鱼类养殖业发展的需求,也是目前国际上亟待攻克的重要科学问题。半滑舌鳎所具有的这些特点使其成为研究鱼类性别决定机制、鱼类性别分化和性别调控机制的模式鱼类。根据全基因组测序获得的部分序列信息,本研究对半滑舌鳎DKKL-1基因进行了c DNA全长克隆,表达分析及染色体定位。DKKL-1基因全长1508bp,包括3’UTR 340bp,5’UTR 493bp一个762bp开放阅读框(ORF),其编码的DKKL-1蛋白相对分子质量为27.4KD,理论等电点为7.98。由253个氨基酸组成。进化树分析表明,半滑舌鳎与奈里朴丽鱼(Haplochromis nyererei)、牛目朴丽鱼(Haplochromis boops)、斑马拟丽鱼(Maylandia zebra)相似性最高,均为81%。序列分析发现,半滑舌鳎DKKL-1蛋白具有Dickkopf-N家族成员特有的保守结构,由第76~125个氨基酸构成,另外含有一个24个氨基酸组成的信号肽。应用实时定量PCR(real-time PCR)方法检测发现,半滑舌鳎DKKL-1基因在肾脏和性腺组织中高表达,在其他组织中少量或微量表达;DKKL-1基因在孵化后80d精巢中表达最高,说明其可能在半滑舌鳎精元细胞分化中起一定作用。总之,半滑舌鳎作为我国重要养殖经济鱼类,DKKL-1基因的克隆及表达分析为将来半滑舌鳎性别控制及提供了基础材料,在促进半滑舌鳎养殖产业的发展,加快海水鱼类养殖结构调整的步伐,推动海水鱼类养殖业的可持续发展中发挥重要作用。


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