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Lin28B对子痫前期模型大鼠胎盘发育的影响

杨云  
【摘要】:目的:子痫前期是一种严重的妊娠期并发症,病因十分复杂,胎盘缺血可能是一个起始事件,但其分子机制尚不清楚。我们前期研究发现正常妊娠胎盘组织中存在Lin28B的表达,且随着孕周的增加呈逐渐下降趋势,推测Lin28B可能在胎盘形成和发育过程中发挥一定作用。正常的妊娠需要滋养细胞的良好浸润,当浸润不良时会导致子痫前期等多种疾病的发生。本实验拟构建子痫前期模型大鼠,探究Lin28B在大鼠胎盘中的表达,明确Lin28B在子痫前期发病及在胎盘发育中的作用。方法:本实验共分两部分进行。第一部分:采用胎盘低灌注压(RUPP)模型构建子痫前期大鼠模型。将清洁级SD大鼠按照妊娠顺序随机分为2组,分别为子痫前期造模组(RUPP组=8只)和正常妊娠对照组(NP组=8只)。孕14天,RUPP组大鼠行腹主动脉+双侧子宫动脉缩窄术,NP组仅行血管分离但不缩窄。孕13和20天测量孕鼠血压观察血压变化;孕12、15、17、19天收集大鼠24小时尿液行尿蛋白定量检测;孕20天剖宫取胎,评估胎鼠发育情况。收集两组大鼠胎盘及三角区组织。采用Real-Time PCR,Western Blot和免疫组化检测胎盘中Lin28B mRNA和蛋白的表达水平。三角区检测细胞角蛋白7(CK7)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平,评估胎盘发育情况。第二部分:大鼠胎盘过表达Lin28B。将清洁级SD大鼠按照妊娠顺序随机分为2组,分别为RUPP+过表达Lin28B组(Lin28B-LV组=8只)和RUPP+空载体组(NC-LV组=8只)。孕14天,两组大鼠分别行腹主动脉+双侧子宫动脉缩窄+胎盘定点注射过表达Lin28B慢病毒/空载体。其他操作同第一部分。结果:(1)与NP组相比,造模后RUPP组孕20天血压改变量及24小时尿蛋白明显升高[(33.3±3.3mmHg)vs(3.3±3.2mmHg),(8.82±1.05g)vs(3.79±0.67g),P均0.001]。RUPP组胚胎吸收率高达69.4%,远高于NP组的3.1%;胎鼠体质量明显低于NP组[(3.82±0.29g)vs(4.48±0.53g),P0.001],但两组胎盘湿重差异无统计学意义[(0.47±0.07g)vs(0.49±0.12g),P0.05]。RUPP组胎盘组织中Lin28B mRNA和蛋白表达水平均低于NP组[(0.771±0.129)vs(1.000±0.099),(0.153±0.100)vs(0.874±0.484),P均0.001]。免疫组化结果提示RUPP组Lin28B及CK7表达显著降低、α-SMA表达明显升高(P均0.05)。(2)大鼠胎盘过表达Lin28B后,与NC-LV组相比,Lin28B-LV组孕20天血压改变量及24小时尿蛋白降低[(11.3±5.9 mmHg)vs(27.3±4.5mmHg),(7.00±0.91g)vs(9.82±1.37g),P0.01,P0.05]。NC-LV组胚胎吸收率高达73%,远高于Lin28B-LV组的38%;胎鼠体质量明显降低[(3.88±0.18g)vs(4.72±0.13g),P0.001],但两组胎盘湿重差异无统计学意义[(0.44±0.03g)vs(0.46±0.04g),P0.05]。Lin28B-LV组胎盘组织中Lin28B mRNA和蛋白表达水平均高于NC-LV组[(5.406±1.204)vs(0.840±0.314),(0.635±0.450)vs(0.141±0.103),P均0.001]。免疫组化结果提示Lin28B-LV组Lin28B及CK7表达显著升高、α-SMA表达显著降低(P均0.05)。结论:(1)孕14天采用腹主动脉+双侧子宫动脉缩窄方法能成功建立子痫前期大鼠模型,表现为大鼠血压升高、蛋白尿增加、吸收胚数量增加、胎鼠体质量降低。(2)子痫前期模型大鼠胎盘组织中Lin28B表达水平明显下降,胎盘组织伴随滋养细胞浸润不足。(3)胎盘组织过表达Lin28B对子痫前期大鼠症状及滋养细胞浸润有明显的改善作用。


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