异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠肺脏的影响

【摘要】： 目的 支气管哮喘(简称哮喘)是一种常见的呼吸道疾病，由多种因素引起的以可逆性气道阻塞、气道高反应性和气道炎症为特征的免疫变态反应性疾病。术前并存哮喘病史者，呼吸道的反应性明显增高，容易诱发支气管痉挛。包括药物、输血、误吸、手术及机械刺激等多种麻醉手术因素，均可致哮喘的突然发作。严重时可危及患者生命。 由于静脉麻醉药异丙酚和氯胺酮具有气道舒张作用，因此常用于哮喘病人的麻醉诱导和维持。哮喘的本质是一种以气道反应性增高为特征的慢性气道炎症，气道痉挛只是哮喘的一个方面。以往的研究往往局限于这两种药物对气道的舒张作用，而关于哮喘发作时，药物对肺脏其他方面的影响研究甚少。人们只是推测这两种药物可能通过缓解支气管痉挛，抑制肺脏微血管的渗出，清除氧自由基，减少肺表面活性物质破坏，而改善肺脏的病变，但尚无此方面的研究。 基于上述原因，本实验建立了哮喘大鼠模型，并在此基础上通过哮喘大鼠气道压及气道染料含量的变化，研究异丙酚和氯胺酮对哮喘大鼠气道痉挛及气道渗出的影响；通过光镜观察肺脏病理变化，肺脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、NO含量和NOS活性的测定，及免疫组化测定iNOS和NT表达，研究异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠肺脏氧化应激的影响；通过膜天平测定肺泡灌洗液(BALF)表面张力的变化，Western-blot法测定肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)含量，及电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构改变，研究异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠肺表面活性物质(PS)及SP-A的影响；利用膜片钳制技术全细胞方法记录不同浓度异丙酚和氯胺酮对正常和哮喘大鼠单一气管平滑肌细胞ATP敏感钾电流(I_(KATP))的变化，在离子通道方面对其作用机制作进一 步的探讨。本研究为临床哮喘病人的静脉麻醉药选择提供了充分的实验依 据。本实验分四个部分，包括：一、异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠气道痉挛 及气道渗出作用的研究；二、异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠肺脏氧化应激的 影响；三、异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠肺表面活性物质及SP－A的影响； 四、异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠单一气管平滑肌细胞I。。的影响。 实验方法 1．实验材料：2月龄的清洁级 SD大鼠 90只，雌雄不拘，体重 160－ 2209，由中国医科大学实验动物中心提供。RM－6200四道生理记录仪 （光电，日本八 小型动物呼吸机（H删rd 638，美国八 低温离心机 （Dupont super T－ZI，美国厂 722型分光光度计（上海分析仪器总厂入 O灯mPus AX－70显微摄像系统（OlymPus，日本）；MetaMomh／OlymPus DP10／BXSI显微图像分析系统（Olympus，日本入 MTP－二型膜天平 （华东师大科教仪器厂厂LM－20A函数记录仪（上海大华仪表厂人 透 射电镜（Hitachi H－600，日本）；垂直电极拉制器（Narishige PP－83， 日本人 AXopatch叫 膜片钳放大器（AXon Insmiment，美国＊ 双轨记忆 示波器（VC－10，日本）；AD／DA转换板（Dopdata 1200，美国）；计算 机支持的 pCLAMP 5．5．1程序。卵蛋白 u，美国入灭活百日咳菌苗 口京生物制品研究所厂 戊巴比妥钠（上海化学试剂采购供应站分装 厂八氢氧化铝（沈阳市试剂三厂厂伊文氏蓝（上海化学试剂采购供应 站分装厂）；iNOS一抗（Santa C。z Biotechnology Inc，美国）；抗硝基酪 氨酸（NT）单克隆抗体（C8yman，美国h免疫组化SP试剂盒门京中 山生物技术有限公司八NO及NOS试剂盒（南京建成生物工程研究所＊ 胶原酶（hwhington，美国八链霉蛋白酶（Merk，日本入 弹性蛋白酶 瞩ina，美国入格列苯腮瞩ina，美国X三磷酸腺昔二钠瞩ina， 美国，异丙酚（AstraZeneca，英国人氯胺酮（上海第一制药厂人 2．异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠气道痉挛及气道渗出的影响：SD大鼠 腹腔注射卵蛋白（OA人氢氧化铝与灭活百日咳菌苗致敏。注射致敏液2 周后，动物随机分为5组＊＝6卜 C组（对照组入静脉注射生理盐水； ppo组，静脉注射异丙酚 50ms·k才‘·h－‘；P100组，静脉注射异丙酚 ·2· 100mg·kg－’·h－‘；K50组，静脉注射氯胺酮 50mg·kg－‘·h－‘；K100 组，静脉注射氯胺酮100mg·kg－‘·h‘。Zndn后静脉注射伊文氏蓝 pB入 30min后静脉注射 OA激发哮喘发作，并维持 30min。观察气道 压、肺系数、肺湿干重比＼肺含水量、肺组织EB含量变化。 3．异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠肺脏氧化应激的影响：SD大鼠致敏及 分组同前，30min后静脉注射OA激发哮喘发作，并维持3h。观察肺组织 SOD活性＼MDA水平、NO水平和NOS活性；应用免疫组织化学染色方 法，测定iNOS和NT的表达；并通过光镜观察肺脏病理变化。 4．异丙酚、氯胺酮对哮喘大鼠肺表面活性物质及其相关蛋白A瞩P －A）的影响：SD大鼠致敏及分组同前，30min后静脉注射OA激发哮喘 发作，并维持 3 h。观察 BALF的表面活性；并应用 Western－blot法，测 定BALF中SP－A含量的变化，电镜观察哮喘大鼠肺泡11型上皮细胞超微 结构的变化。