收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

凋亡抑制基因Survivin在非小细胞肺癌中的表达及其与P53、bcl-2、增殖、凋亡相关性研究

丛德刚  
【摘要】: 背景和目的 肺癌是严重危害人类生命和健康的常见病,目前国内外肺癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势。在我国城市中,肺癌的死亡率已成为恶性肿瘤之首。尽管联合应用手术、放疗、化疗、生物治疗等各种手段,肺癌患者的预后并无明显改善,原因在于肺癌的发生发展是多基因改变、多阶段的复杂过程。因此,深入研究肺癌分子生物学特征,对肺癌的早期诊断、治疗及改善预后具有重要意义。 恶性肿瘤是细胞遗传突变所致的一类分子疾病,其主要特征之一是失控性细胞增殖。近几十年来围绕细胞增殖的分子调控机制研究取得重大突破,证明癌基因活化和(或)抑癌基因失活是肿瘤发生与发展的一个重要因素。然而进一步研究发现,某些类型的癌基因和抑癌基因的主要作用是阻止细胞的正常死亡,从而揭示,肿瘤细胞内死亡调控机制失常也与肿瘤的形成密切相关。于是,细胞凋亡与癌变的关系引起人们的广泛注意,成为目前分子细胞生物学一个新的研究热点。细胞凋亡是机体重要的生理过程,起着维持内环境稳定的关键作用。凋亡调节紊乱有助于细胞的恶性转化和肿瘤的进展。是恶性肿瘤形成的重要机制之一。 凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)是抑制细胞凋亡的重要成分。Survivin是新近发现的一种IAP家族成员之一,其组织分布具有明显的细胞选择性,与另一凋亡抑制基因bcl—2的分布显著不同,在正常成人已分化的组织(胸腺、生殖腺除外)不表达,而在多种肿瘤组织中表达,且Survivin的表达与患者的预后密切相关。Survivin的表达还与细胞增殖有关。 目前关于Survivin在肺癌中表达的报道甚少,其与临床病理特征的关系尚无公认的结论。肺癌组织中Survivin基因表达与细胞增殖、凋亡关系的研究尚未见报道。为此,我们采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT—PCR)方法检测了43例肺癌组织、10 例良性瘤病变和43例病灶旁正常肺组织中 Survivin mRNA的表达,采用免 疫组织化学方法检测了43例肺癌组织和配对的病灶旁正常肺组织中Sur- vivin蛋白及P53人—2蛋白的表达,并探讨其与临床病理特征及P53上 一2之间的关系。我们还应用流式细胞术,对肺癌细胞的增殖活性和凋亡 水平进行检测分析,期望证明在肿瘤细胞系研究中得出的结论,即Survivin 表达与肿瘤细胞的增殖和凋亡有关。 材料与方法 一、实验材料 标本来源于中国医科大学第一临床学院胸外科200年12月一2002年 4月手术的53例患者,其中男33例,女20例,年龄15-76岁,平均年龄 O5.5n.7)岁,肺癌患者43例,肺良性瘤病变10例N例炎性假瘤J例 肺结核球在例肺错构瘤*例肺平滑肌瘤人配对的病灶旁正常肺组织43 例。对肺癌患者依据1997年新的修订标准进行TNM分期,其中1期27 例,11期4例,皿期9例J期3例。按病理形态学分为:鳞状细胞癌16例, 腺癌 23例,大细胞癌 4例。按分化程度分为:高、中分化癌 12例,低分化。 未分化癌31例。所有患者均为原发性肺癌,术前均未接受过化疗或放疗等 任何治疗。 二、实验方法 1.逆转录PC R检测Survivin基因表达 取50叫00mg组织,加人IInl Tizol溶液彻底匀浆。按Tizol试剂盒说 明书用一步法提取总RNA,用DNA/RNA测定仪测定RNA浓度和纯度。 反应体系中加人 10 x RNA PCR Biber 2叶10mM dNTP mix Zgl、25mM MgCI。4卜l、Oliso(dT)(2·somol/…)lul、RNA(二 u矿…)2“RNase inhibitor (40u/pl)0.sgl、AMV Reverse TranscriPtase(su/PI)二pl、dd H。O 7.sgl。 反应条件:42℃ 30min,99℃ sndn,ST sndn。 Survivin基因引物序列为了一GGACCACCGCATCTCTACAT(上游)和 5’ -GCAC*C皿GCAGTITCC(下游)。在25 pl反应体系中含有2.srnmoV L dNP Zpl、20pmoUL上下游引物各 0.Zpl、cDNA3…、Taq DNA Polyme删e (SU/L)0.Zpl、10 x B滥r 2.spl。反应条件:94℃变性 3而n;94℃ Indn, ·2· 55t*ill,72℃ 3*ill,35个循环;72℃延伸 7mill。用内参照 p一肌动蛋白 印一actin)检测逆转录效率。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳,漠化乙锭 瞩B)显色。用 GDS 8000凝胶印 成像仪进行摄像分析。用diX174-Hinc if(TaKaR公司)Markers为分子大小对照确定阳性琼脂糖凝胶电泳条带。 2.免疫组化法检狈Survivin、I?53、hcf-2蛋白表达 采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶连接uP)免疫组织化学方法,一 抗 Survivin鼠抗人单克隆抗体(工作浓度为 1:30XP53鼠抗人单克隆即用 型抗体人一2鼠抗人单克隆即用型抗体不P试剂盒为福州迈新公司产品。 实验步骤按试剂盒说明书进行。将已知阳性胃癌切片作为阳性对照,用 PBS代替一抗作为阴性对照。胞核或胞浆染为淡黄至棕黄色者为阳性细胞 标志,将阳性细胞按其数量及显色强度分为3级:表达弱阳性(十人即阳性 细胞数d0阮,显色强度为淡黄或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色;表达强阳 性(十人即阳性细胞数>60阮,


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 谢秉煦;;小细胞肺癌时的组胺酶活性[J];国外医学.内科学分册;1976年08期
2 江庆平;;比顺铂更有效、更易于耐受的碳铂(Carboplatin)[J];国外医学情报;1985年17期
3 郑玉琰,陈达庄,许宏乾,孙昆良,高岩;放射治疗在非小细胞肺癌中的作用[J];中华放射肿瘤学杂志;1987年01期
4 白振明;对并用化疗的非小细胞肺癌放疗后食管狭窄的探讨[J];国外医学.临床放射学分册;1991年01期
5 赵家美;廖美琳;徐扣凤;;MAP治疗非小细胞肺癌的疗效分析[J];实用肿瘤杂志;1993年04期
6 傅深,蒋国梁,王丽娟,钱浩,叶明,傅晓龙,赵森,何少琴,刘泰福;超分割放疗非小细胞肺癌疗效分析──临床Ⅲ期研究[J];中华肿瘤杂志;1994年04期
7 相洪琴;;突然戒烟可能是肺癌的征兆[J];国外医学情报;1995年08期
8 刘树旗,孙树岚,张建军;250例非小细胞肺癌死亡病例综合治疗临床分析[J];肿瘤;1996年S2期
9 陈玉蓉,廖美琳,赵家美,王慧敏,阎文晰;IVP治疗Ⅳ期非小细胞肺癌的疗效分析[J];肿瘤;1996年S2期
10 张应潮,付彬玉,王谊,王华明,于晴,陈益;米托蒽醌、威猛治疗非小细胞肺癌的临床研究报告[J];肿瘤;1996年S2期
11 张应潮,付彬玉,王谊,王华明,于晴,陈益;米托蒽醌、威猛治疗非小细胞肺癌的临床研究报告[J];肿瘤;1996年S2期
12 ;细胞角蛋白-21-1作为非小细胞肺癌的生物学标记[J];国外医学.免疫学分册;1996年04期
13 ;气管、肺[J];中国医学文摘(肿瘤学);1997年03期
14 郑春秀 ,李书权;不能切除的非小细胞肺癌临床处理准则[J];国外医学.肿瘤学分册;1998年01期
15 史建军,王兆武;Ⅲ期非小细胞肺癌术后放疗可提高局部控制率和生存率[J];广州医药;1998年02期
16 王春波!150040,王瑞芝!150040,乔文波!150040;非小细胞肺癌放化综合治疗的前瞻性随机研究[J];中国肺癌杂志;2000年05期
17 赵荣国,苟勇;CAP方案治疗非小细胞肺癌的近期疗效观察[J];四川医学;2000年03期
18 彭明轩,彭江涛;中心型非小细胞肺癌的综合治疗[J];河南外科学杂志;2000年03期
19 王绿化,殷蔚伯;非小细胞肺癌的放射治疗进展[J];中国肿瘤;2001年02期
20 李国生,张道荣,刘冬,王恩华,邱雪杉,张丽红;p34~(cdc2)在非小细胞肺癌中的表达及意义[J];中国医科大学学报;2002年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵妍妍;周红;;青蒿琥酯对非小细胞肺癌细胞(A549细胞)放射增敏作用及其机制研究[A];第十届全国化疗药理暨抗感染药理高峰论坛资料汇编[C];2010年
2 王明钊;魏煜程;沈毅;;非小细胞肺癌微转移研究进展[A];中华医学会第六次全国胸心血管外科学术会议论文集(胸外科分册)[C];2006年
3 魏来;谭文勇;罗成刚;;EGFR与非小细胞肺癌[A];第二届湖北省肿瘤靶向治疗学术会议论文选[C];2007年
4 张开贤;李苓;邢超;张开国;袁倩倩;郝崇礼;满其荣;王伟;杨森;;CT引导射频消融术治疗非小细胞肺癌35例[A];中国(第七届)肿瘤微创治疗学术大会暨世界影像导引下肿瘤微创治疗学会成立筹备大会论文汇编[C];2011年
5 刘鉴峰;刘金剑;褚丽萍;段亚君;冯丽娜;杨翠红;孔德领;;多肽导向的dendrimer纳米药物载体靶向非小细胞肺癌的研究[A];天津市生物医学工程学会第30次学术年会暨生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2010年
6 张慰慈;魏海明;田志刚;;人白细胞介素22在非小细胞肺癌中的表达以及对肿瘤细胞凋亡的影响[A];第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2006年
7 李彦鹏;韩星敏;谢新立;;非小细胞肺癌组织中p-糖蛋白的表达对~(18)F-FDG浓聚的影响[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
8 徐丽;张振;赵子龙;朱海珍;谭蔚泓;方晓红;;核酸适体筛选及生物学功能研究[A];中国化学会第28届学术年会第3分会场摘要集[C];2012年
9 严丹芳;严森祥;杨劲松;孙晓丽;刘俊青;;口服易瑞莎致非小细胞肺癌颅内出血事件3例报道及文献复习[A];2009年浙江省放射肿瘤治疗学学术年会论文汇编[C];2009年
10 郭金栋;吕长兴;王家明;刘俊;李洪选;王常禄;高兰婷;赵蕾;;立体定向放射治疗针对不能手术的Ⅰ/Ⅱ期非小细胞肺癌的疗效初步分析上海交通大学附属胸科医院放疗科[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋虹;GLYPICAN-3基因在非小细胞肺癌中的表达与意义[D];第二军医大学;2004年
2 王秀问;生长抑素受体介导的靶向治疗对非小细胞肺癌耐药的逆转作用及其机制研究[D];山东大学;2009年
3 邢力刚;PET-CT对非小细胞肺癌精确放疗计划影响的系列研究[D];天津医科大学;2004年
4 杨志强;非小细胞肺癌中HDPR1与连环蛋白家族成员之间相互调控关系的研究[D];中国医科大学;2010年
5 杨宏丽;晚期非小细胞肺癌优化中医临床方案研究[D];北京中医药大学;2005年
6 王苏;DLL4/Notch信号通路相关蛋白在非小细胞肺癌中的表达及初步结构生物学研究[D];第二军医大学;2011年
7 高禹舜;Ⅰ期非小细胞肺癌miRNA-34b/c编码DNA甲基化的研究[D];北京协和医学院;2011年
8 臧东钰;14-3-3zeta在T_1期非小细胞肺癌中的表达及与肺癌侵袭、转移和凋亡关系的研究[D];中国医科大学;2010年
9 赵晋波;成束蛋白Fascin-1在非小细胞肺癌迁移、侵袭和增殖中作用的研研究究[D];第四军医大学;2010年
10 谭晓刚;microRNA表达谱与非小细胞肺癌临床特点和预后的研究[D];中国协和医科大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张志坤;P120在非小细胞肺癌中表达及其意义[D];中国医科大学;2003年
2 赵春雷;~(18)F-FDG PET/CT 在非小细胞肺癌术前分期中的价值[D];天津医科大学;2004年
3 汤燕明;国际非小细胞肺癌新旧TNM分期系统有效性的比较研究[D];中国医科大学;2010年
4 海燕;非小细胞肺癌细胞中Nrf2的调控与生物学功能研究[D];浙江大学;2011年
5 崔爽爽;MicroRNA表达与非小细胞肺癌放疗敏感性关系的研究[D];中国协和医科大学;2010年
6 齐大亮;恩度联合TP方案对非小细胞肺癌术后辅助治疗的临床研究[D];天津医科大学;2010年
7 余美剑;奥沙利铂对非小细胞肺癌A549细胞系的放射增敏作用[D];南昌大学;2010年
8 范龙方;Keap1对人非小细胞肺癌生长的影响及其机制研究[D];浙江大学;2011年
9 陈源;非小细胞肺癌中巨噬细胞集落刺激因子表达及CD163+巨噬细胞浸润与预后的关系[D];广西医科大学;2011年
10 董昕;VEGF-C、VEGFR-3在非小细胞肺癌中的表达及其意义的研究[D];中国医科大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 张文天;非小细胞肺癌中医药综合医疗方案研究进展顺利[N];科技日报;2009年
2 记者高新军;专家提出 建非小细胞肺癌中医临床指南[N];中国中医药报;2009年
3 陈列欢;礼来的Alimta 获批用于治疗非小细胞肺癌[N];医药经济报;2004年
4 郭锦;非小细胞肺癌治疗模式转变[N];健康报;2011年
5 记者 刘肖勇;肺癌术后情况有了新的预测方法[N];广东科技报;2009年
6 天津市肿瘤医院放疗科 袁智勇 赵路军;早期非小细胞肺癌能首选立体定向放疗吗[N];健康报;2010年
7 徐超;“话疗”为带癌生活添乐趣[N];科技日报;2009年
8 王伦;为非小细胞肺癌患者快速提供个体化靶向治疗[N];中国医药报;2009年
9 首都医科大学肺癌诊疗中心主任 支修益;治肺癌不能单靠“一把刀”[N];保健时报;2009年
10 记者 毅超;非小细胞肺癌治疗有新进展[N];广东科技报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978