cagA～+ Hp菌株在胃癌发病机制中作用的研究

【摘要】： 前言 胃癌是严重威胁人类健康的肿瘤之一，在我国其死亡率居各种恶性肿瘤之首。研究胃癌的发生、发展机制，探寻合理、有效的预防措施，将对胃癌的早期预防及控制胃癌的术后复发具有重要意义。 流行病学调查显示，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)感染与胃癌发生存在显著相关性，Hp感染后胃癌发生率增加4-9倍，60％胃癌患者伴有Hp感染。1994年世界卫生组织国际癌症研究机构正式将Hp列为第一类生物致癌因子。与其它肿瘤一样，胃癌的发生并不是由单一因素决定的，而是多种因素参与，在其发展的不同阶段相互作用的结果。目前认为胃癌可能是Hp长期感染并与其它因素共同作用的结果，Hp感染为胃癌发生的始发因素，而综合因素决定了胃癌的最后形成。近年来的研究指出，Hp毒素相关蛋白A(CagA)阳性菌株感染具有更强毒力和危险性。CagA~+菌株与癌前病变及胃癌关系更为密切。Blaser等研究发现，感染有CagA抗原的Hp菌株明显增加患胃癌的危险性，Perez-Perez等比较了不同国家CagA~+菌株感染流行率，范围在20.6％-82.2％，发达国家人群感染率明显低于发展中国家，Webb等比较了不同国家cagA~+Hp感染与胃癌死亡率，认为cagA~+Hp感染与患胃癌危险性有正相关关系。为探讨CagA/cagA Hp菌株感染与胃癌相关性疾病及其胃癌发生的可能的病因学联系，在国内我们对辽宁省庄河胃癌高发区高危人群CagA Hp菌株感染状况进行了流行病学调查分析。结果显示，在胃癌高发区庄河CagA Hp菌株感染与癌前病变及胃癌的发生呈明显正相关，其中胃癌组CagA Hp菌株感染率为52.2％，与张联等报道的山东省临朐县胃癌高发区胃癌组CagA Hp菌株感染率52.3％相一致。(详见论文一)。但CagA/cagA Hp菌株感染究竟如何最终导致胃癌的发生，目前机制尚不清楚。 环氧合酶-Ⅱ(Cyclooxygenase-2，COX-2)是十年前Dr.Simmons实验室发现的一种与COX-1具有相似作用的同功酶。它们是介导花生四烯酸代谢中的限速酶，这些酶催化前列腺素H_2(PGH_2)的生物合成，PGH_2是 PGE:等前列腺素类衍生物的分子前体。在正常情况下，CoX一2在机体组 织细胞中不存在，它可由外界刺激如细胞因子，肿瘤启动子等诱发产生，参 与多种炎症反应。而COX一1在多种器官组织细胞中有稳定的表达，它主 要参与维持机体的自身稳定。阿斯匹林等非街体抗炎药类(NSAIDs)是 COx一1及COX一2的抑制剂。近几年的研究显示COX一2在结肠一直肠 癌、食道癌等肿瘤中有过度表达，在家族性多发性息肉动物模型中可诱发 COX一2的表达。流行病学研究指出应用NSAID。可有效抑制结肠一直肠 癌、食道癌的发病率，可有效缩小FAP的数量和体积。NSAIDs和COX一2 特异性抑制剂可诱导肿瘤细胞的凋亡。越来越多的证据表明，COX一2在 肿瘤的发生过程中起着重要的作用。 Hp感染可引起炎症反应，它是否诱导COX一2表达呢?Romano等用 MKN28胃粘膜细胞系分别与Hp及大肠杆菌孵育培养，24小时后发现Hp 一组COX一 2 mRNA水平增加5倍，PGE:增加3倍，而COX一1的表达没有 变化，大肠杆菌一组则无相应改变，提示这一反应是特异性的。还有人报道 COX一2诱导胃癌细胞系增生，Hp+胃粘膜活检组织COX一2表达阳性， Hp一胃粘膜活检组织COX一2无表达。但在胃癌组织中，Hp感染，特别是 cagA+Hp菌株感染与Cox一2表达之间的关系如何，目前尚无报道。 本研究首次采用流式细胞仪方法以及Westem blot方法，分别对32例 胃癌组织及相应的癌旁正常组织COX一2表达水平进行定量检测及分析， 并通过PCR方法对32例胃癌组织的cagA基因进行扩增检测。旨在分析 胃癌组织COX一2的表达水平与cagA+感染的相关性，探讨cagA十Hp菌株 感染与COX一2表达之间的可能的内在性联系。(详见论文二)。 白细胞介素一8(interleukin一8，IL一8)是1987年Yoshimura发现的第 一个趋化因子，它可以激活和趋化嗜中性粒细胞，在许多疾病的炎症反应中 发挥重要作用。近来的研究表明lL一8是一种多功能细胞因子，可在多种 因素刺激下由多种细胞，包括肿瘤细胞释放。IL一8与肿瘤关系密切，支气 管原位癌、肺癌、肝癌等肿瘤组织中均检测到IL一8 mRNA及蛋白表达。将 IL一8基因转染至肿瘤发生及转移能力很低的人黑色素瘤细胞系分别用IL 一8反义核昔酸转染后，肿瘤细胞增殖受到显著抑制，加入重组IL一8后， 肿瘤细胞增殖有所恢复，结肠一直肠癌伴有转移患者血清中lL一8水平明 显高于无转移者，研究证实IL一8主要是作为肿瘤细胞增殖;促进肿瘤细胞 移动，以及作为肿瘤血管发生因子促进肿瘤组织的新血管形成，促进肿瘤发 生、发展与转移。目前，关于IL一8与胃癌发生、发展及转移机制的研究刚 刚见报道。 许多研究表明Hp，特别是c鳃A十Hp能诱导IL一8的产生，引起炎症的 进一步加重;有关IL一8在胃癌前兆及胃癌中表达与cagA+Hp菌株感染的 关系，目前尚未见报道。 本研究采用流式细胞仪及PCR技术，分别对27例胃癌及癌旁正常组 织IL一8的表达水平与c铭A+Hp感染进行检测，并用免疫组化及ELISA法 对178例胃癌前兆中IL一8表达与C鳍A+Hp感染进行分析，期望为探讨几 一8在胃