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p27~(kipl)、cyclinE与结肠癌临床病理因素及预后关系的研究

孟庆凯  
【摘要】: 目的 大肠癌的发生同其它肿瘤一样是细胞周期的调节失控导致细胞的增殖和分化异常所致。细胞周期的运行受周期素(cyclin)、周期素依赖性激酶(cyclin dependent kinase,CDK)和周期素依赖性激酶抑制剂(CDK inhibitor,CDKI)在多个层次上的共同调节。前二者结合可催化细胞周期进程。CDKI是细胞周期的负性调控因子,通过抑制cyclin-CDK复合物的形成及生物活性,阻滞细胞周期进程,抑制细胞过度增生,并参与肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡。p27~(kip1)就是一个多功能CDKI。cyclinE在多种肿瘤中有基因扩增及过表达,并且已经被证实是一种癌基因。越来越多的研究表明肿瘤的发生与周期蛋白和其它细胞周期相关基因的异常表达有关,G_1期周期蛋白基因失调,蛋白表达过量在多种肿瘤中可以见到。这其中P27~(kip1)与cyclinE的表达异常有重要作用。研究显示p27~(kip1)与cyclinE在多种肿瘤如胃癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、头颈部肿瘤及白血病等均有异常表达。国内对两者在结肠癌中的表达及相互关系尚未见报道。本实验系用免疫组织化学方法对不同Dukes分期、组织学分型的结肠癌中p27~(kip1)、cyclinE表达进行研究,探讨二者与结肠癌生物学行为和预后的关系。 实验材料与方法 一、标本选择 实验组标本来源于辽宁省肿瘤医院大肠外科1994年~1995年收治的71例结肠癌组织标本。男性33例,女性38例,年龄42~79岁(平均65岁)。以上所有病例均随访5年。肿瘤临床病理 分期按我国改良法Dukes分期标准,DukesA、B期35例,DukesC 期 20例,D此既D期 16例。肿瘤组织学分级按 WHO肠道肿瘤组 织学分型标准一989)分为低度恶性(包括高分化和中分化)与高 度恶性(包括低分化、粘液腺癌与印戒细胞癌h本试验低度恶性 组46例,高度恶性组25例。对照组21例,均取自切除标本距肿 瘤10cm以外的正常结肠粘膜。所有标本均做sum连续切片供 HE和免疫组织化学染色。 二、方法 二.采用 S-P法。抗 P27和 CyClinE两种抗体孵育前,切片经 微波处理修复抗原,按说明书进行操作,DAB显色。阳性对照选 已订购的阳性对照片,PBS代替一抗作阴性对照。p27“’‘和 cy- ChilE鼠抗人单克隆抗体门用型,工作浓度 1:50厂S-P试剂盒和 DAB显色剂盒均为Maxin公司产品。 人结果判定与数据处理:采用双育法,两名有经验的病理医 师阅片。p27‘”‘以细胞核、cyclinE以细胞核和/或细胞浆出现明 显棕黄色颗粒作为阳性细胞。随机选择10个高倍视野,计数 1000个肿瘤细胞,计算阳性细胞百分率。超过10%肿瘤细胞着色 为 p27“”阳性,超过 5%肿瘤细胞着色为 CyClinE阳性。采用 SAS6.12版统计软件包进行数据分析,组间比较采用X‘检验,相 关分析采用配对计数资料X‘检验。 实验结果 1.本组71例结肠癌标本中 p27“”染色阳性35例,占49.3%, p27‘”‘阳性表达率随 Dukes分期升高而下降,D你回A、B期与 C 期、D期比较,差异均有显著性意义u二0.028,0.022LC期与 D期比较,差异无显著性意义(P二 0.722人肿瘤浆膜受浸组 P27“”表达率降低,与浆膜未受浸组比较差异有非常显著性意义 ·2· P=0.002入此外,在淋巴结转移组 P27“’‘蛋白阳性表达率降低, 与非转移组比较差异有显著性意义u=0.042人高度恶性组与 低度恶性组比较,p27“’‘阳性表达率降低,有非常显著性差异(P= 0.001人 p27“’‘表达与肿瘤大体分型J瘤占肠管周径比例无统 计学差异。 2.71例中,CyClinE染色阳性33例,占46.5畅。CyClinE阳性 表达中 DukesA、B期与 D期比较,差异有显著性意义(P=0. 002XDukesA、B期与C期及C期与D期比较,差异均无显著性 意义(P=0.052刀.187)。月瘤浆膜受浸组的CyClinE表达率增高 与浆膜未受浸组比较差异有非常显著性意义(P=0.007人 Cy- clinE表达率在淋巴结转移与否差异无显著性意义伸一0.428人 高度恶性组与低度恶性组比较,cyclinE阳性表达率增高,有非常 显著性差异?=0.00人肿瘤大体分型各组间 cyclinE表达无显 著性差异(P=0.847,0.612,0.276)。且瘤占肠管周径比例各组 间 CyClillE阳性表达率比较,有显著性差异吁一0.015人 3.在随访 5年内死亡的 34例患者中,p27“’‘阳性表达率 23. 5%堆石4人生存的患者中 p27“’‘阳性表达率73%,H者比较差异 非常显著(P=0.皿*。cyclinE阳性表达率在已死亡患者中为 61.8%,在生存的患者中占32.4%,两者比较差异有显著性意义 (P=0.013)。P27+/eye一组患者生存率高于 P27-/eye十组,二 者之间差异有非常显著性意义瞩一0 00八 4.在p27b一卜性表达的35例中,CyClinE阴性者25例,p27b一 阴性的36例中,CyClinE阳性者23例,相关性分析表明:结肠癌组 织中 P27h’与 crclinE表达呈负相关(r=-0.354,X=8.898,P二 0.003)。 ·3·


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