细胞周期调控因子CyclinD1、CDK4在肺腺癌、鳞癌中的表达及其临床意义

【摘要】： 前言 肿瘤的发生、发展及转移是一个涉及多方面、多因素、多阶段、复杂的演化过程。其中细胞周期素D1(Cyclin D1)和细胞周期素依赖蛋白激酶4(Cyclin-dependent kinase 4,CDK4)与癌变的关系十分密切，目前已在人类多种肿瘤中发现其蛋白质过表达。 CyclinD1是细胞周期素家族中的主要成员，基因定位于染色体11q13，调控细胞周期由G1进入S期。人类恶性肿瘤中，常常出现CyclinD1细胞周期调控蛋白的异常表达，导致肿瘤的发生发展。CDK4编码基因位于染色体12q，对调节细胞周期也起重要作用。在G1期末，CyclinD1与CDK4结合，可使视网膜母细胞瘤易感基因(retinoblastoma,Rb)的蛋白产物pRb磷酸化。在G0期和G1期，pRb表现为低磷酸化或去磷酸化，从而能阻止细胞周期进入S期。而由CyclinD1和CDK4结合所导致的pRb磷酸化可导致其失活，推动细胞周期的进程。 近年大量研究证实CyclinD1和CDK4在一些恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要作用，并与这些肿瘤的预后有关。检测非小细胞肺癌(NSCLC)中CyclinD1和CDK4表达对研究其生物学行为以及探讨二者在恶性肿瘤的发生、发展中的作用可能有较重要的实际意义。本试验采用免疫组化方法研究CyclinD1、CDK4在肺腺癌、鳞癌中的表达状况，并探讨其临床意义。 实验材料与方法 一、实验材料 标本来源：收集中国医科大学附属第一医院胸外科1998年一 2002年的刀例肺癌手术标本，均经过病理确诊。男性54例，女 性23例；年龄37－78岁，平均61．2岁。肺腺癌36例、肺鳞癌41 例。分化程度：高分化23例，中分化ZI例，低分化33例。淋巴结 转移情况：N／3例，N／ 3例，Nf 例。并选取 10例同期肺良性病 变（肺结核3例、支气管扩张症7例）手术标本。所有标本均经 10％甲醛固定，石蜡包埋。所有肺癌患者术前均未行放疗、化疗。 主要仪器：英国产BRIGHT5040型切片机，格兰仕牌微波炉， OMMPUS－BHZ显微镜等。 试剂：即用型鼠抗人 CyclinD单克隆抗体由北京中山生物技 术有限公司提供，工作浓度1：50。鼠抗人CDK4单克隆抗体为美 国Santa Cruz公司产品，购自北京中山生物技术有限公司，工作浓 度为乙50。免疫组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。 DAB显色试剂及其他常规试剂由中国医科大学胸科实验室提供。 二、实验方法 S—P免疫组化染色：所有蜡块标本连续 5 urn切片一脱蜡一 灭活一抗原修复一免疫组化染色一复染一脱水一封片。 结果判定：CyclinDI以细胞浆和（或）细胞核出现棕黄色颗粒 为阳性，CDK4以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性。每例标本随机 观察10个高倍视野，各计数100个肿瘤细胞中阳性细胞所占的比 例。无明显阳性细胞为阴性（一厂阳性细胞数小于 20％为弱阳性 （十太阳性细胞数大于 20％为阳性（＋十人其中弱阳性表达（＋） 归人阴性（一）中。最终结果是由两位病理医师用双盲法分别观 察每例切片所获得的一致意见。 ·2· 统计学分析：采用卡方检验，P＜0．05为差异有显著性统计学 意义，P北．of为差异有非常显著性统计学意义。 实验结果 1．CyclinDI．CDK4在肺良性病变组织中不表达，在肺腺癌＼鳞 癌中，阳性表达率分别为 54．5％（42刀7）和 72．7呢（56／77），统计 学分析示二者在肺良性病变组织和肺腺癌、鳞癌间存在明显差别 （P＜0．01）。42例 CyClinDI 阳性表达者，12例为细胞核阳性表 达，30例为细胞浆阳性表达。 L对77例肺腺癌、鳞癌的临床病理参数与CyclinDI的表达进 行研究，结果表明 CyclinD表达与患者年龄、性别、组织学类型等 均无明显关系。高、中、低分化程度的肺腺癌＼鳞癌中CyclinDI的 表达率分别为30．4％门／23）、、47．6％（10／21）、75．8％（25／33），其 组间存在非常显著的差异（P＜0．0＊。在无淋巴结转移的肺癌 中，CyClinDI阳性率为41．9％门 ＊而有淋巴结转移的肺癌 中，其阳性率为 70．6％（24／34），两者相比有显著差异（P＜0．05）。 CyclinD在细胞核和细胞浆阳性表达者，其淋巴结转移率分别为 83．3啪（10／12）和 46．7％ （l／30），两者相比有显著差异（P＜0． 05）。 3．CDK4表达与患者年龄、性别、组织学类型等均无明显关 系。高、中、低分化程度的肺腺癌＼鳞癌中CDK4的表达率分别为 47．8的（JI／23）、71．4％（15／ZI）、90．9啪（30／33），其组间存在非 常显著的差异（P＜0．01人在无淋巴结转移的肺癌中，C＊K4阳性 率为53．5％汪3／43人而有淋巴结转移的肺癌中，其阳性率为85． 3％p904人两者相比有非常显著差异O＜o．01人 ·3· 讨 论 细胞周期控制点＊heck point）是细胞周期循序进展的关键部 位，决定着DNA复制及细胞分裂的起始与完成两个方面。由细胞 周期蛋白（Cyclin入细胞周期素依赖蛋白激酶CDK及其抑制因子 CKI组成的Cyclin－CDK－CKI系统共同构成了