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支气管哮喘患儿诱导痰液中P物质及炎性细胞变化的临床研究

叶丽红  
【摘要】: 前言 支气管哮喘是多种炎症细胞和炎症因子共同参与的气道慢性炎症,该炎症使易感者对多种激发因子具有气道高反应性。随着对气道炎症研究的深入,由肺内感觉神经末梢释放的感觉神经肽所介导的气道神经源性炎症日益受到重视。P物质(SP)是感觉神经肽中重要的一种,它具有收缩气道平滑肌、促进血浆外渗、促进粘液高分泌、促进炎症介质释放及增加气道高反应性等方面的作用,所以认为SP与哮喘关系密切。诱导痰技术是近年开展的,具有安全、有效、无创、重复性好、可靠性高等优点,且诱导痰中炎性细胞、炎性介质等检测明显优于血液及在小儿难于开展且创伤性较大的支气管肺泡灌洗液(BALF),为此我们进行了哮喘患儿诱导痰中SP变化的检测。 对象与方法 1.临床资料: 急性发作期(中重度)患儿入院前3天均无静脉或口服激素史。急性发作期病例数34人,男18人,女16人,平均年龄7.1岁(4~14岁);缓解期30人,男18人,女12人,平均年龄6.8岁(4~14岁),两组年龄无明显差异。正常对照组18人,男10人,女8人,平均年龄7.0岁(4.5~12岁),既往无毛细支气管炎或喘息性支气管炎病史,无哮喘病史及家族史的健康儿童,1个月内无呼吸道感染史。 2.室验方法: *)痰液的采集:哮喘急性发作期、缓解期、正常对照组儿重,各 采集诱导痰液一次。诱导痰液参照Pin等方法采集,分别用3%、 4%5%的生理盐水超声雾化吸人,每次约7分钟,累计雾化时间 不超过30分钟,有痰时可随时咳出到一清洁平M中。选合格痰约 为*5毫升。取其中Ind痰标本加人含有10%EDTA50gl、抑肽酶 8皿U中的预冷试管中,-70℃保存待用。再选痰液约0.5 Inl用中 国医科大学生产的痰液蓄积保护液处理混均、离心,1900转/分约 10分钟,选细胞沉淀层涂片进行HE染色。 ②痰液的处理:痰标本用 4%醋酸稀释至 20Inl,用匀浆仪搅 匀,40000 x g离心 30ndn,取上清液过* 柱,分别用 4%醋酸 10Inl,蒸馏水 10Inl冲洗,最后再用 Zrnl,0.豆%三氟醋酸(内含 80% 乙睛)冲洗并收集冲洗液,真空冷冻抽干至粉末,-70℃存放。 ③岿P检测:进行放免测定时,将提存物用 0.3 Inl分析纯缓冲 液O0nM磷酸缓冲液,PH7.人含3.7mg/Inl的EDTA,0.5%牛血 清白蛋白)复溶后,取0.ZInl进行放免检测,参照放免说明书步骤 进行检测。 3.统计学处理: 实验结果均用均值。标准差k。S)来表示,均数间比用t检 验。 结 果 二.哮喘患儿急性发作期、缓解期及正常对照组支气管诱导痰 中细胞计数变化。 哮喘患儿急性发作期痰中性粒细胞占总数的百分比较缓解 期、正常对照组,明显增高,差异显著f均<认0*哮喘急性发作 期、缓解期支气管诱导痰嗜酸粒细胞占总数的百分比较正常对照 组的,明显增高,差异显著J均<0.01。 ·2· 2.哮喘急性发作期、缓解期及正常对照组间支气管诱导痰SP 含量的变化。 哮喘急性发作期支气管诱导痰SP含量明显高于缓解期及正 常对照组,差异显著人均<0刀1;缓解期组与正常对照组比较,差 异无显著性,P>O.05。 讨 论 HSP与小儿哮喘的研究: 1感觉神经肽与哮喘: 支气管哮喘发病机制较复杂,随着对气道炎症研究的深人,由 肺内感觉神经末梢释放的神经肽所介导的气道炎症反应即神经源 性炎症日益受到重视,为研究哮喘的发病机制开辟了一个新的途 径。 气道的神经调节系统较复杂,除了经典的胆碱能和肾上腺素 能神经系统外,还包括非肾上腺素能A胆碱能(NANC)神经系 统。NANC神经系统包括非肾上腺素能抑制神经和非胆碱能兴奋 性神经,感觉神经肽是非胆碱能兴奋性神经的重要递质/P是其 中重要一种。SP等感觉神经肽是当该神经末梢受到物理、化学等 因素刺激时,通过轴突反射机制释放的。轴突反射机制是B。es 在1986年首次提出的,即当气道上皮损伤时,暴露出传人神经末 梢,经气道内炎症介质刺激,可以选择性刺激因损伤而暴露的C一 纤维神经末梢,通过轴突反射,从感觉神经的侧突分枝释放SP等 感觉神经肽,从而在气道内发挥其生物活性,导致支气管收缩、增 加气道粘膜渗出、促进粘液高分泌及促进细胞因子、炎性介于释放 等方面,产生一系列的哮喘病理特征。SP是具有众多生物活性的 11肽在P及其受体广泛分布于呼吸道及肺内气道上皮、血管内皮 及腺体周围。InlllD等研究显示人和动物的气道内均存在有SP ·3· 免疫活性的感觉神经通路,并从上皮至动脉是一条连续的通路。 2石P在小儿哮喘中的作用: SP主要通过引起气道平滑肌收缩、增加血浆外渗


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