紫杉醇对自体移植静脉内膜重构作用的研究

【摘要】： 前言 自体静脉在治疗动脉损伤、闭塞等疾病中广泛应用，但移植后期自体静脉再狭窄发生率可达20-50％，甚至更高。其原因一般认为是由于损伤、炎症反应、缺血、血液动力学变化等多种因素所致的血管内膜增生造成的，其中血管平滑肌细胞的大量增殖、迁移至内膜，分泌细胞外基质并沉积在内膜起关键作用。有效地抑制细胞的过度增殖，迁移、合理地调控血管的重构，可以预防血管再狭窄的发生。紫杉醇是近二十年来发现的化学结构新颖，作用机理独特的新型抗癌药。在对其抗癌机理的研究中发现它不仅可以抑制细胞快速增殖还可以诱导细胞因子如TNF-α，以及促进细胞凋亡，对血管平滑肌细胞的增生、迁移有较好的抑制作用。本实验旨在通过组织形态学、免疫组织化学的方法观察紫杉醇对移植静脉血管重构的影响，以期合理调控血管的重构过程维持功能稳态。 材料与方法 1．动物分组 将Wistar大鼠50只随机分为10组，即空白对照组(0、7、14、28天组)；干预组，包括单次剂量组(7、14、28天组)；两次剂量组(14、28天组)；三次剂量组(28天组)。 2．动物模型建立 10％水合氯醛(2ml/kg)腹腔注射麻醉，取颈部切口，应用显微外科技术切取颈静脉5mm，置于同侧颈动脉，用11-0无损伤线作端端吻合，血管通畅实验判定血管通畅情况。空白对照组分别于术后0、7、14、28天取材；单次剂量组于术后第2天注射紫杉醇 Dm才kg）于术后第7、14在8天取材；两次剂量组于术后第2、7天 注射紫杉醇，术后第14上8天取材；三次剂量组于术后第2＊＊ 大注射紫杉醇，术后第28天取材。 3．标本处理及检测 标本于10％中性福尔马林中固定，石蜡包埋，做连续5 pm厚 切片，分别做HE染色人erhoeff氏铁苏木素染色及免疫组化染色， 常规观察形态学变化，计算内膜厚度，PCNA阳性细胞百分比及 MMP一表达分值。MMP一分值计算标准：0．无染色；1．弱、部 分染色一．中度部分染色；3．中度广泛染色；4．强、广泛染色。 4．数据处理 应用 SPSS软件进行数据分析，数据资料用 k切表示，组间比 较应用方差分析和 X‘检验，P＜0．05有统计学意义。 结 果 移植静脉7天时，内膜厚度增加，空白对照组平均为18．8 t 1．3乙单次剂量组为14．26。0．乃，两组间有显著差别（P＜0。0门。 14天时，空白对照组内膜平均厚度为22．30。＊70，单次剂量组与 两次剂量组分别为18．30 ZI．30和16．99。1．44，与空白对照组相 比，差异显著u＜0．05厂但两者之间差异不显著河＞0．05八28 天时，空白对照组为27．82。3．45，单次剂量组，两次剂量组和三 次剂量组分别为23．56＊1．84，ZI．36 ZI．90，19．67 ZZ．of，与空白 对照组相比，存在显著差异。PCNA阳性细胞百分比，7天时，空白 对照组为39．37。7．6O，单次剂量组3个67 ti．of，14天时空白组 为30．7互土二．46，单次剂量组为27．23 Z且．阴，两次剂量组为24．23 门．23，空白组与单次和两次组差异显著；28天时，空白组为 18． 粘土二．叩，单次组15．76 L二．析，两次剂量组u．兆。二．56，三次剂 量组为9．71 2．32；空白组与单次剂量组相比差异不显著，与两 次、三次剂量组相比差异显著。MMP一二表达的分值，7天时，空 ·2· 白组3．61。0．28，单次剂量组为2．67。O．36，两者差异不显著河 ＞0．05），14天时；空白组为3．SO土0．二8，单次组为3．20 ＊．二8，两 次剂量组为2．80。0．18，空白组与单、两次剂量组相比差异显著 （P＜O．05），28天时，空白组为2．nZ O．19，单次剂量组为2．26。 0．15，两次剂量组为2．co tZ．33，三次剂量组为1．74 fo．15，空白 对照组与三次剂量组相比差异显著门＜0．05人与单次、两次剂量 组相比差异不显著u叩．05人 讨 论 虽然自体静脉移植在临床中广泛应用，但远期再狭窄影响其 应用效果。一般认为是由于损伤、炎症反应、血液动力学变化等多 因素作用下，血管壁收缩型VSMCS转变为合成型VSMCS，从中膜 向内膜下迁移，并在内膜下大量增殖，分泌细胞外基质造成内膜增 生形成无益性重构造成再狭窄。在本实验的对照组中发现静脉移 植后早期主要表现为细胞的大量增殖和迁移，而中晚期主要表现 为细胞外基质的积聚。 紫杉醇是近二十年来发现的新型抗癌药物。研究证实它作用 于快速增殖细胞的微管使其异常聚合，抑制纺锤体的形成，在G／ M期阻断细胞分裂，从而抑制细胞的增殖。紫杉醇还可以抑制血 管平滑肌细胞的增殖与迁移，从而改变血管的重构过程，诱导细胞 产生肿瘤坏死因子，促进细胞凋亡。对血管再狭窄的研究已经证 实TNFa可以抑制VSMCs的增殖。 本组资料结果表明空白对照组在0＊＊4上8天时内膜逐渐增 厚与干预组相比在7上4上8天时，内膜厚度存在显著差别u＜O． 05X说明干预组内膜增生受到抑制。在干预组中14天时单次剂 量组与两次剂量组内膜增厚差别不显著河＞o．05入28天时两次 剂量组与三次剂量组