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重组血小板生成素对骨髓抑制小鼠的促血小板生成作用

张丽娟  
【摘要】: 前言 骨髓抑制是当前放、化疗最常出现的副作用,可以导致严重的白细胞、血小板减少和贫血,随着粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等造血因子的应用,严重的粒细胞减少得以改善,而因血小板减少导致的出血则成为一直困扰临床医生的一个难题。血小板减少,严重地限制了临床上放、化疗的治疗剂量,从而影响了一些对放、化疗敏感的肿瘤的治疗效果。虽然输注新鲜浓集血小板悬液可以减少严重出血的危险,但也不可避免地增加了血源性感染、发热反应和产生输血相关的抗血小板抗体的概率,而且输注血小板费用昂贵,因此通过骨髓巨核细胞生成的刺激可能更是一个合理的选择。1994年血小板生成素(Thrombopoietin TPO)被克隆纯化成功,TPO作为一种特异性的细胞因子,已被证实是一种巨核细胞生成和血小板生成的刺激和调节因子,TPO在体外可以刺激巨核细胞克隆的生成,使巨核细胞分化标志物增多,在正常动物中应用TPO可以极大地增加循环血中血小板计数,同时使骨髓巨核细胞数目和体积增加。如何将TPO更有效地用于临床,国内外专家进行了多种偿试,积累了经验,但尚未有最后定论。本课题中我们通过放化疗造成骨髓受抑制、血小板减少的小鼠模型,之后在不同时间给予重组人血小板生成素(recombinant human thrombopoietin rhTPO),通过观察小鼠血小板和骨髓巨核细胞数的变化情况,来研究rhTPO对放化疗后骨髓受抑制小鼠血小板以及骨髓巨核系统的刺激生成作用,并通过不同给药方式来比较治疗效果,以找出最佳给药方法。 材料与方法 采用动物试验方法,实验 0天一次性给与 Balb/C /J’鼠 3.SGy X线照射及 50mg/kg卡铂腹腔内注射制成骨髓受抑制、血小板减 少模型,小鼠分为三个治疗组h=10人采用放化疗前、后持续给 药(Pre”OSt组X放化疗前给药(Pre组人放化疗后给药口OSt组) 等三种不同给药方式,分别于实验一5-+9天、-5——1天、门 一门4天皮下注射 rhTPO瞩0卜少kgl天人设对照组* 组,n 习0L注射生理盐水。观察以下指标①血小板下降的最低值;② 血小板持续低下时间t;(血小板小于基础值30%入③血小板恢复 时间以血小板恢复至基础值50%八④小鼠胸骨骨髓病理,计数 巨核细胞数(Mmm勺进而比较各治疗结果的差异。 实验结 果 l一用药后血小板uLT)数量的变化:Pre”OSt组及Pre组自 应用 hTOP后第 3天起,PLT开始升高,第 6-7天达到高峰,平均 值升高 3-4倍。实验0天放化疗后,Pe/Post、Pre、PostJontrol四 个组PLT开始有不同程度的下降,结果是:①PLT最低值分别为 223。犯、1扬L 28、217 S 30、77。二3(X 10’/L)(与对照组相比P 值均<0.00 l),②t;分别为l.7、3.3、l.5、6.5(天)(与对照组相比 P值为<o.OO二,<o.05,<O.00且);③。为15、17.7上互.7、22(天) (与对照组相比P值为<0.00,<0.05,<0.001)。 2.骨髓巨核细胞计数:于实验第9* 天检测小鼠胸骨病理标 本,结果第9天时Pre组及Pe/POSt组与对照组比较骨髓巨核细 胞数明显升高u<0.001人在第 15天时 POSt组骨髓巨核细胞数 显示了明显升高的趋势。 ·2· 讨 论 TPO是由3 32个氨基酸组成的糖蛋白,为原癌基因C-MPI 的配体,主要产生于肝脏和肾脏。TPO的主要生物活性,也是最先 发现的生物活性,是促进巨核细胞的成熟和血小板的生成,TPO 作为一种造血细胞生长因子在正常动物中具有相对的谱系特异 性,而对骨髓抑制的小鼠,TPO治疗不仅可以加速血小板的恢复, 也可以加速红细胞和中性粒细胞的恢复。本研究给予小鼠一定剂 量的放化疗造成小鼠骨髓抑制后,选择了三种不同的rhTPO给药 方法实验。结果放化疗使对照组小鼠的血小板和白细胞迅速出现 下降,分别于第 9天和第 11天降至最低,为基础值的 10.4%和 9. 5%,分别经过22天和19.3天恢复到了基础值的50%(或以上人 对照组的骨髓巨核细胞也在放化疗后受到明显的抑制。rhTPO治 疗组显示了明显的升血小板的作用,与对照组相比在血小板下降 最低值、血小板恢复速度等指标上均显示了较好的疗效,POSt组及 Pre/Post组与对照组相比则差异显著。许多研究都证明了TPO的 生血小板作用。Grossmann等以 1-20KU门/鼠一9 pyks)的 不同剂量给正常小鼠连续注射7天治疗,在低剂量时表现出剂量 依赖性的血小板增多,于第5天血小板数开始增加,8刁o天达到 峰值。我们在实验中放化疗处理前给予rhTPO组也在5-7天内 血小板数升高了3倍以上,显示了hO对正常小鼠明显升血小板 作用。在对骨髓抑制小鼠的研究中 Grossmann等用 TPOS KU或更 多的剂量治疗仍然得到了剂量依赖性模式的血小板计数的恢复, 包括血小板最低点的升高和恢复的加快,但是各剂量之间的差异 并不显著。Neelis等以 5 Gy X线(亚致死量)照射恒河猴,使其骨 髓造血抑制,在给予rhTPO门0pg/kg.d.二一Zld)治


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