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原发性甲状旁腺机能亢进甲状旁腺细胞增生、凋亡与骨病影像、病理相关性实验研究

白荣杰  
【摘要】: 背景和目的 原发性甲状旁腺机能亢进症(Primary hyperparathyroidism,PHPT)简称甲旁亢,是一种使病人虚弱、残废,甚至严重威胁病人生命的内分泌性疾病。全世界每年新增甲旁亢病例近100,000例,欧美国家的发病率在1.3%左右,如美国每年有16,000例甲旁亢病人需手术治疗。文献报道达百例以上文章不少,如Gaz等在1987年就发表了麻省总医院1200例甲旁亢的手术治疗效果。Hodback等在1995年报道了瑞典Salhgrin医院甲旁亢的手术就达896例之多,其在内分泌疾病中的发病率已仅次于糖尿病和甲状腺疾病,被列为第三位。而国内病例报道不多,近年来,我国有关甲旁亢和甲状旁腺瘤的文献中共报道760余例,说明我国甲旁亢的发病率比过去大幅度增加,不能再视为罕见病,而是一种常见病。从资料报道看,我国对PHPT的诊断存在不少问题,主要是术前确诊率低,延误了正确诊断和治疗时机。而PHPT在我国早期骨病型较多,常误为骨囊肿,骨肉瘤,骨畸形。但PHPT所致的心、肾、骨系统损害却是不可逆的,严重影响病人生存质量,更加证明了早期诊断的迫切性和重要性。因此,提高对本病的认识,掌握其临床特点,重视早期症状,生化异常及早期发现骨质改变对PHPT早期诊断,减少误诊至关重要。 PHPT主要X线征象为骨膜下骨吸收,扁骨或肋骨纤维囊状骨炎,晚期骨盆,四肢可发生变形,典型X线征象对诊断极有帮助。但骨骼丧失钙质30~50%才能在X线检查时发现骨质改变,而CT和MR检查与普通X线检查相比可更早期发现骨质改变,为甲旁亢的早期诊断,及时治疗提供重要的科学依据。目前,关于原发性甲旁亢甲状旁腺(简称甲旁腺)细胞增生与凋亡,国内外报道尚不多见,而关于甲旁亢骨病的CT、MR征象与病理基础的研究,国内外均未见报道。 本课题利用高磷饮食诱发甲状旁腺机能亢进,建立原发甲旁亢动物模型,探讨甲状旁腺细胞增生与凋亡,在原发性甲旁亢发病机制中的作用。对甲旁亢动物模型行CT、MR骨扫描,并与病理对照,研究甲旁亢骨病CT、MR 征象及其病理基础,评价CT、MR扫描检测早期P川叮的准确性。测定甲旁 亢模型的骨密度(Bone而ne耐density,BMD),探讨甲状旁腺细胞增生与凋 亡程度与骨密度的相关性,为评价甲旁亢的预后提供重要依据。 材料与方法 一、原发性甲状旁腺机能亢进动物模型建立:选择健康成年中国白兔 (4石个月龄)120只,体重2.0一skg,不分性别,随机分为两组,对照组和 实验组各60只,根据喂养时间将对照组和实验组各分为第1一6个月组。 在相同的温度与湿度条件下,对照组以正常饮食(C盯P,1:0 .7)喂养,实验 组以高磷饮食(C盯P,1:7)喂养,分别在喂养前一周及喂养后第1,2,3,4,5 和第6个月末时,经耳缘静脉采血,做血钙,血磷,甲状旁腺素(PTH)测定, 同时进行普通X线、CT、MR检查,并在高磷饮食喂养后第1一3个月末,将 对照组及实验组动物各10只处死,第4一6个月末分别处死剩余动物,对所 有动物甲旁腺、肾及骨骼进行病理检查,观察甲旁腺增生情况及骨骼影像与 病理特征。 二、cT、MR及病理对照:将对照组(56只)与实验组(54只)动物在麻、 醉状态下做全身骨CT、MR扫描(包括颅骨、四肢骨、骨盆、脊柱),分析其 CT、MR表现,同时利用定量CT检测甲旁亢模型骨矿密度(BMD)进行骨密 度测定,了解骨代谢情况。在动物死后作病理检查,分析其病理所见,二者 对照,研究影像表现及病理基础。 三、甲状旁腺细胞增生与凋亡测定: 1.腺体标本取材:在动物死亡之后,立即取出动物的甲状腺及甲状旁 腺复合体放人4%多聚甲醛中固定。 2.实验方法: l)甲旁腺细胞计数:标本置于4%多聚甲醛中固定24小时,常规石蜡‘ 包埋,切片厚度4卿,HE染色。光镜下证实甲旁腺是否增生,在病理图文 分析系统下,每例随机选取四个区域,以400倍视野范围分别计算每个视野 的甲旁腺腺体细胞数,取四个视野的平均值作为每例4加倍视野范围的甲 旁腺腺体细胞数。 2)腺体PCNA和时一的表达:采用免疫组化学ABC法,检侧腺体PC- NA和Bd一表达(试剂购自博士德公司),在光镜下计算阳性细胞比率,每 例随机选择4个视野,结合现染色片,统计每张玻片腺体细胞总数及其阳 性细胞数,然后计算出阳性细胞数(每11拟〕个腺体细胞中阳性细胞数)。 3)细胞凋亡定量检测:采用DNA片段末端标记法(TUNEL),该方法特 别适用于凋亡细胞较少的组织,步骤按试剂盒说明进行操作(试剂盒购自 Boe城ger Mannheim公司)。光镜下观察阳性细胞,每例随机选择4个视野, 结合IIE染色片,统计每张玻片腺体细胞总数及其阳性凋亡细胞数,然后计 算出凋亡指数(每1000个腺体细胞中阳性凋亡细胞数)。 四、统计学分析 所有计量资料均采用又土s表示,采用t检验分析两组资料间有无显著 性差异,以回归分析两组资料之间的关系。P0.05或P0.01时,有统计 学意义,利用SPSS 1 1 .5软件进行统计学处理。 结果 1.高磷饮食可成功建立原发性甲状旁腺机能亢进动物模型。整个实 验过程中,实验组血PTH水平明显高于对照组(P0 .05)。在前3个月时, 血钙水


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