收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

c-myc反义寡脱氧核苷酸治疗类风湿关节炎的研究

赵欣欣  
【摘要】: 前言 类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的以关节组织慢性炎症性病变为主要表现的全身性疾病。其主要病理变化特点为持续性反复性关节滑膜炎,炎性细胞浸润,血管翳形成,渐进性软骨、骨组织的破坏。目前的临床治疗手段尚不能达到理想疗效。类风湿滑膜类似于局限性侵袭性生长的肿瘤,RA滑膜成纤维细胞样细胞(B型细胞)和滑膜内血管内皮细胞表达c-myc原癌基因。c-myc原癌基因的表达是细胞增殖的重要标志。c-myc原癌基因是逆转录病毒v-myc癌基因的细胞同系物,表达于多种细胞中,其编码的转录因子在控制细胞增殖、凋亡和分化过程中起重要作用,控制着几种与生长和分化相关基因转录的活化或抑制。其调节异常(如:染色体易位,DNA扩增)在多种人类肿瘤的发生、进展和早期复发中起关键性作用,因此,其成为重要的治疗靶位。 反义核酸技术是一种分子靶向性的治疗方式,它利用反义寡核苷酸在细胞内部与靶mRNA序列特异性结合,干扰其修饰或翻译过程,或通过Hoogsteen氢键结合在靶DNA上,形成局部的三螺旋结构,干扰靶基因的转录。外源性反义寡核苷酸在体内很容易被核酸酶降解,因此作为药物合成的反义寡核苷酸必须进行一定的改性,才能对核酸酶有较强的抵抗,以期在靶位点达到有效浓度,同时又不增加其毒性,目前使用最多的改性方法是对反义寡核苷酸中的磷酸二酯键进行硫代磷酸化修饰。由于反义寡核苷酸是大分子物质,细胞膜对其通透性低,因此必须在载体的帮助下,才能有效进入细胞。脂质体是人工制备的由磷脂双分子定向排列而成的类脂小体,主要成分是天然磷脂和类固醇,具有制备简单、适合生物体内降解、无毒和免疫源性,各种水溶性和脂溶性分子都可以很容易被包入脂质体,十分有利于传递反义核酸,已被美国癌症协会批准为临床基因治疗的首选载体。 已有一项细胞培养研究显示c-myc反义寡脱氧核苷酸(antisense oli-godeoxynucleotides,AS ODN)能诱导人RA滑膜B型细胞凋亡。本研究是在这一基础上进行的深入研究。 目的 1.观察硫代磷酸化修饰的c一myc AS ODN在血清存在条件下对培养的 RA滑膜B型细胞增殖的影响及诱导凋亡的作用;2.对c一myo mRNA两个 不同位点构建c一myc AS ODN进行对照实验,观察它们对队滑膜细胞增殖 的抑制作用是否不同,以期能选择出更有效的c一myc反义寡脱氧核昔酸序 列;3.了解c.myc AS ODN是否对滑膜中的血管翁形成具有抑制作用,观察 c一myo AS ODN对血管内皮细胞系ECV304细胞增殖的影响。通过以上研 究初步明确c一myc AS ODN治疗RA的可能性。 方法 自一年轻女性活动期RA患者的膝关节液分离滑膜细胞,DMEM培养 液培养,传代纯化出滑膜B型细胞;RPMI 1640培养液培养ECV 304细胞。 构建2条e一mye AS ODN序列,并构建它们的有义序列(sense oligodeoxynu- deotides,5 ODN)作为反义特异性阴性对照。针对翻译起始位点(AUG)的 c一m}rc AS ODN序列为:5‘一AAC GTT GAG GGG CAT一3‘,其5 ODN序列为5‘- ATG CCC CTC AAC GTT一3‘;针对编码区决定子(eoding region determinant, CRD)的c一myc AS ODN序列为:5‘一ATG TAT GCT GTG GCT一3’,其5 ODN 序列为5’一AGC CAC AGC ATA CAT一3‘。在对滑膜B型细胞的研究中ODN 的磷酸二醋键全部进行了硫代磷酸化修饰,而在对ECV304细胞的研究中 ODN的磷酸二醋键只在两端进行了部分硫代磷酸化修饰。ODN以阳离子 脂质体Lipofectin为载体转染细胞。用M件法对细胞的增殖进行检测,用 荧光显微镜观察Hoechst 33258染色法,流式细胞仪检测Annexin一V- FITC和PI法检测细胞凋亡的存在和变化,用流式细胞仪检测细胞内c一myc 蛋白量的变化。 结果:针对翻译起始位点(AUG)的c一myo AS ODN(2 .5林moFL一10林moFL) 能显著抑制滑膜B型细胞增殖,在作用24h时此抑制作用就已发生,使细胞 数目减少的最大值为40%(2.5林moFL,48h),相对应的。一myC 5 ODN (10协m0FL一20林moFL)对滑膜B型细胞增殖无显著影响,该c一myc AS ODN(5.0卜moFL)能下调c一myc蛋白表达,诱导滑膜B型细胞凋亡。针对 CRD的e一mye AS oDN(1 .25林moFL一10林mol/L)能显著抑制滑膜B型细 胞增殖,在作用至48h时此抑制作用才开始起效,使细胞数目减少的最大值 为41 .4%(5林mol/L,48h),相对应的e一哪e 5 ODN(10林mol/L)也具有显著 的抑制增殖作用。2种序列的c一myc AS ODN在浓度为10林m0FL时抑制细 胞增殖的作用均开始下降。 针对翻译起始位点(AUG)的e一哪e AS ODN( 2.5林moFL一5·o林moFL) 能显著抑制ECV304细胞的增殖,这种抑制在。一myo AS ODN作用于细胞 12h就已发生,相对应的c一myc 5 ODN(2.5林moFL)也对ECV304细胞增殖 产生了相同程度的抑制作用,而5.0卜moFL。一myc 5 ODN有促进ECv304 细胞增殖的作用,并且不同程度硫代磷酸化修饰的c一myo 5 ODN均有抑制 或促进ECV304细胞增殖的两种作用。c一myc AS ODN和。一myc 5 ODN对 ECv304细胞。一myc的表达均无明显改变。 结论 硫代磷酸化的c一myc反义寡脱氧核昔酸在一定浓度


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 赵欣欣,赵丽娟,肖卫国;针对c-myc mRNA两个不同位点的c-myc反义寡脱氧核苷酸抑制类风湿滑膜细胞增殖的比较[J];中国医科大学学报;2005年05期
2 陈克敏,柴维敏;类风湿关节炎的MR表现[J];中国医学计算机成像杂志;2003年05期
3 王金荣,韩秀珍,王永康,吕晓霞,王宏伟,韩波,庄建新,杨渝珍;血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子-α在佐剂关节炎大鼠滑膜中表达[J];中国病理生理杂志;2004年11期
4 于孟学;细胞因子与类风湿关节炎的发病机理──类风湿治疗的回顾与前瞻[J];北京医学;1995年01期
5 陆意;类风湿关节炎发病机制的研究进展[J];国外医学.免疫学分册;2001年05期
6 曾润铭 ,张忠民 ,金大地;类风湿关节炎滑膜细胞向破骨细胞分化实验研究[J];中华风湿病学杂志;2005年03期
7 陈龙喜,黄海洋,陈鹰;中医药治疗类风湿方案[J];职业与健康;2002年06期
8 铃木聪,李艳,周静,赵宁,贾红伟,李学武;针刺治疗类风湿性关节炎动物实验研究概况[J];中国中医基础医学杂志;2004年04期
9 张万昌,张再夫;应用氨甲喋呤治疗类风湿关节炎[J];白求恩医科大学学报;1994年04期
10 于孟学,程蓉,王叙冬,张春芳,李培峰;铜锌超氧化物歧化酶在风湿性疾病患者滑膜中的变化[J];基础医学与临床;1995年01期
11 付志厚,刘晓平;滑膜软骨瘤病(附16例报告)[J];中国矫形外科杂志;1996年03期
12 杨驰!200011,邱蔚六!200011,哈綨!200011;颞颌关节镜诊治滑膜软骨瘤病附一例报道[J];华西口腔医学杂志;1997年01期
13 赵德本,齐伯庸,杨钟旭,朴显达,朴哲;髋关节滑膜软骨瘤穿破关节囊一例[J];中华外科杂志;1997年12期
14 王荣茂,余英豪,王隐村,钟国荣;膝关节滑膜血管瘤(6例报告及国内文献总结)[J];中国矫形外科杂志;1997年02期
15 王荣茂,卢森桂;滑膜软骨瘤病27例临床分析[J];中国矫形外科杂志;1997年02期
16 侯勇于,孟学,姜玉娟,王丛妙,伍沪生;人基因重组IFN-γ对滑膜细胞分泌TNF-α作用机制的研究[J];中华风湿病学杂志;1998年04期
17 ;滑膜中的微生物DNA[J];国外医学.内科学分册;1998年02期
18 赵挺武,何志晶,李洪志,刘玉芳;滑膜骨软骨瘤病30例报告[J];中国矫形外科杂志;1998年03期
19 李培勇,于俊峰,江旭峰,陈刚,孙文善,朱承谟,汪勇先;~(188)Re-硫化铼滑膜切除术实验研究[J];中华核医学杂志;1999年02期
20 韩广岩,梁靖!272149;滑膜骨软骨瘤病的X线诊断(附32例报告)[J];中国煤炭工业医学杂志;1999年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 尹纪伟;赵福涛;;骨髓间充质干细胞移植对胶原诱导性关节炎滑膜增生的影响和机制[A];2011年华东六省一市风湿病学学术年会暨2011年浙江省风湿病学学术年会论文汇编[C];2011年
2 潘险峰;张正治;;无滑膜肌腱在体滑膜化的实验研究[A];中国康复医学会修复重建外科专业委员会第十四次全国学术交流会论文集[C];2004年
3 赵欣欣;赵丽娟;;三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞增殖的影响[A];第十届全国风湿病学学术会议论文集[C];2005年
4 狄正林;章军辉;何志勇;;膝重度屈曲僵硬类风湿并骨关节炎的全膝关节表面置换术[A];2009年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2009年
5 何书励;孙静;夏维波;姜艳;李梅;王鸥;聂敏;邢小平;胡莹莹;刘怀成;孟迅吾;周学瀛;;进行性假性类风湿发育不良加息的WISP3基因突变研究[A];中华医学会第三次骨质疏松和骨矿盐疾病中青年学术会议论文汇编[C];2011年
6 邱逦;;微泡介导的超声空化效应消融抗原诱导性关节炎滑膜血管翳的实验研究[A];中国超声医学工程学会第三届全国肌肉骨骼超声医学学术交流会论文汇编[C];2011年
7 樊余富;张丽华;赵俊;戈吉庆;邓国初;;中西医结合治疗中晚期类风湿骨关节破坏23例报告[A];全国老年骨质疏松专题学术研讨会论文汇编[C];2000年
8 田家玮;杜国庆;张凤山;李英楠;李洋;;超声对类风湿性膝关节炎滑膜血管翳的定量研究[A];中国超声医学工程学会肌肉骨骼系统超声专业委员会第二次全国学术会议论文汇编[C];2009年
9 章军辉;狄正林;徐荣明;;关节镜下滑膜切除术治疗类风湿性关节炎[A];全国中西医结合学会骨伤科专业委员会第十二次学术年会浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十次学术年会论文汇编[C];2004年
10 刘志明;龙星;李健;魏丽丽;龚忠诚;;颞下颌关节滑膜间充质干细胞神经分化潜能的实验研究[A];第七次全国颞下颌关节病学及(牙合)学研讨会暨《颞下颌关节紊乱病及口颌面疼痛的基础与临床进展》国家级继续教育学习班论文汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵欣欣;c-myc反义寡脱氧核苷酸治疗类风湿关节炎的研究[D];中国医科大学;2004年
2 潘险峰;无滑膜肌腱在体滑膜化的实验研究[D];第三军医大学;2003年
3 尹宏恩;血管活性肠肽、β-内啡肽对胶原诱导关节炎模型的神经—免疫调节及细胞内信号传导途径研究[D];中国协和医科大学;2004年
4 李健;颞下颌关节滑膜间充质干细胞的实验研究[D];武汉大学;2004年
5 程勇;颞下颌关节盘前移位滑膜的病理性改变[D];武汉大学;2004年
6 王建华;类风湿性关节炎的反义VEGF基因治疗实验研究[D];第二军医大学;2001年
7 王宏光;反义寡脱氧核苷酸抑制肝癌细胞VEGF的表达及肝癌细胞中VEGF的自分泌机制[D];第四军医大学;2002年
8 郑刚;α1,4半乳糖糖基转移酶反义寡脱氧核苷酸治疗卵巢癌的实验研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
9 金玉怀;CCK-8对大鼠成纤维细胞样滑膜细胞增殖及MMPs产生的影响及其可能作用机制的研究[D];河北医科大学;2003年
10 张友磊;乙酰肝素酶反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌侵袭转移和血管生成的抑制作用[D];第二军医大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵文君;核心肽免疫调节抑制类风湿滑膜增生的研究[D];天津医科大学;2011年
2 司庆阳;清泄少阳方对佐剂性关节炎大鼠滑膜炎症作用机理的实验研究[D];北京中医药大学;2004年
3 张声鹏;白虎追风丸抗RA作用机理研究——对AA大鼠滑膜细胞功能的影响[D];广州中医药大学;2001年
4 王晓峰;神经生长因子和P物质在膝骨性关节炎滑膜中的作用[D];河北医科大学;2002年
5 刘光军;低能量激光与消灵仙软膏对兔膝关节缺血再灌注损伤的治疗[D];第三军医大学;2003年
6 茹晋丽;血管内皮生长因子在类风湿关节炎的表达[D];山西医科大学;2003年
7 项伟雄;颞下颌关节盘前移位后滑膜的纤溶酶原激活剂系统表达[D];浙江大学;2006年
8 李芳;类风湿关节炎患者血清基质金属蛋白酶-9水平及意义的探讨[D];山西医科大学;2005年
9 张伟平;VEGF、bFGF在急性白血病中的表达及VEGF特异性反义寡脱氧核苷酸对HL-60细胞生长的影响[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
10 高宜军;~(32)P-磷酸铬胶体放射性滑膜切除术的实验研究[D];苏州大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 顾雪冬;别错把风湿当成类风湿[N];中国消费者报;2003年
2 王振岭 杨叁平;火酒疗法治类风湿疗效好[N];大众卫生报;2004年
3 天津医科大学第三医院教授 高家骏;治类风湿别让激素“长相伴”[N];健康报;2002年
4 本报记者 王峰;类风湿患者用药宜先强后弱[N];中国消费者报;2002年
5 元城;治类风湿别让激素“长相伴”[N];中国高新技术产业导报;2002年
6 本报记者 王建影;类风湿之“痹”尚难治愈[N];保健时报;2004年
7 湘雅医院儿科副教授 宁忠来;孩子反复发烧 当心类风湿[N];大众卫生报;2001年
8 重庆 陈永久;辨证施治类风湿[N];民族医药报;2000年
9 南京金陵蚂蚁研究治疗中心顾问 吴志成;不要滥治类风湿[N];中国中医药报;2000年
10 ;抓住细节治类风湿[N];健康时报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978