收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

狼疮性肾炎易感基因的定位和研究

李艳秋  
【摘要】: 目的 系统性红斑狼疮(SLE)是以多种自身抗体为特征的自身免疫病,好发于生殖期妇女,主要合并症为免疫复合物沉积于肾组织基底膜引起的狼疮性肾炎(LN),而由LN所致的肾功能衰竭是SLE的主要死亡原因。SLE发病机制复杂,属于多基因复合性疾病。与单基因疾病的孟德尔遗传方式相比,它是由多种基因以一种不清楚的方式和环境因素相互作用引起的,其性状变异呈连续的数量级差改变,可以用正态分布曲线表示。微卫星是短小重复序列,以相对高的频率随机分散于白细胞基因组中,每个微卫星具有独特的侧翼序列,应用PCR扩增后的片段以重复序列长度显示长度多态性。应用这种长度多态性在进行家系分析时可以决定奴亲源性的等位基因的染色体定位,因此这些基因可以用来确定一种疾病的易感基因的染色体定位。用这种方法(genome-wide scan,基因组扫描)人们已经成功的定位了Ⅱ型糖尿病和多发性硬化的易感基因。但是人类SLE易感基因的外显率低,如果在人类中进行基因组扫描,则需要几百对同胞对。而且人类SLE的临床表现复杂多变,收集精确的表现型很难。小鼠模型则具有人类无法比拟的优势,通过回交或杂交能产生足够多的具有或不具有该疾病的后代,疾病的表现型单一,暴露环境容易控制。啮齿类动物与人类的基因具有高度同源性和同线性,当研究者从小鼠模型中获得结果后,就可以直接进行人类该位点的连锁分析,进一步当某一易感基因被确认以后,同样的基因及在同一生物学作用过程中其他的基因都可以作为候选对象。新西兰小鼠(NZBxNZW)F1随着年龄的增长会自发的发生类似人的SLE,小鼠的基因与人类具有较高的同源性,其近交系小鼠表现型与基因型连锁性极强,因此,新西兰小鼠是最早最广泛应用的理想的SLE模型,也是进行基因组扫描的常用对象。我们以(NZBxNZW)F1xNZB回交小鼠为研究对象,对其LN进行微卫星遗 传标记的数量性状位点(QTL)分析,初步进行了LN易感基因染色体定位 的研究,并进一步应用PCR一SSCP方法对北方汉族人群集落刺激因子3 (‘尹)基因,即中性粒细胞集落刺激因子(G一CSF)基因进行了单核昔酸 多态性的筛选,通过比较具有单核昔酸多态性的位点各基因型在正常人和 S比病人中的分布来研究负户基因与SLE(LN)的相关性。 实验材料 1.实验试剂微卫星遗传标记购于美国researeh genetic公司 (Huntswille,AL),PCR反应用Taq酶和dNTP购自美国BOehringerM~- ha汕公司,饱和酚购自上海生工生物技术有限公司,Tris碱及丙稀酞胺购自 Sigzna公司,PCR引物由上海生工生物技术有限公司合成,其余试剂为国产 分析纯。 2.实验动物NZB(新西兰黑色品系小鼠)、NZW(新西兰白色品系小 鼠)、NZB/NZWF(NZB与NWI杂交子一代)小鼠购于日本静冈实验动物 中心,二级动物。回交小鼠以雌性NZB/NZWFI与雄性NZB小鼠回交,实 验中使用的回交小鼠全部为雌性,共280只。 3.人类标本收集1999年2月一2003年5月我院住院SLE病人共 215例,所有患者均符合1982年美国风湿病学会SLE的诊断标准。男女之 比为1:8.7。选取健康对照459人,其他自身免疫病患者对照78人,各种 原发性肾脏疾病患者对照91人。所有人选对象均为北方汉族人群。记录 所有病人的临床资料。 实验方法 选用在NZB、NZW小鼠间具有多态性的微卫星遗传标记,覆盖小鼠19 条染色体。提取鼠尾DNA,PCR扩增微卫星DNA片段于18%聚丙烯酞胺 凝胶进行电泳分离(PCR一SSLP)后行基因分型。肾脏受累依其蛋白尿的程 度作为数量性状行QTL分析,初步确定了LN易感基因的染色体定位。提 取SLE病人末梢血DNA,在GenBank网上查询人类负户基因的核昔酸序列 (NT刁10755),根据其提供的单碱基变异数据在网上合成引物,用 PCR一络 CP方法检测出单核昔酸多态性,比较具有单核昔酸多态性的位点各基因型 在正常人和SLE病人中的分布来研究负乃基因的单核甘酸多态性与SLE 的相关性。 结果 本研究包括以下三个部分: 论文一: 1 .QTL分析结果表明(NZBxNZW)FlxNZB回交小鼠LN易感基因位点 分别位于小鼠的第n和第17染色体上,与相应的微卫星DNA遗传标记 DllMia63和D17Mit61肯定连锁。在第n染色体Dll杭a63位点附近存 在C尹基因,在第17染色体D17Mit61位点附近存在乃必和林2基因,提 示这些基因可能为小鼠LN的候选易感基因。 2.通过比较(NZB元NZ毋)Fl xNZB回交小鼠Dn芯a63位点和 D17Mit61位点B/B和B/W型之间累积蛋白尿的阳性率,均为B/W型B/ B型,经x,检验结果显示,P值0.005,说明来源于NzW。 3.根据回交小鼠D17械t61基因型和刀11从a63基因型,将(NZBx- NZW)FI xNZB小鼠分为4组。可见同时携有D17Mi巧1基因型B/W和 DllMia63基因型B/W两个易感基因位点组的蛋白尿的阳性率比单基因 组增高,说明新西兰小鼠LN易感基因之间有相互促进作用。 论文二: 1.在中国北方汉族人群中,12个经过PCR扩增的负刀基因片段中,4 个可以通过SsCP方法检测出单核昔酸多态性,它们分别是C趁刀(394)、 C趁冷(1205)、负刀(CDS)、负月(1869),其中3个单核昔酸多态性在SLE病 人和正常对照组中


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王者非,王国保,张晓峰,童俊荣;狼疮性肾炎合并急性肾衰的临床及病理分析[J];第一军医大学学报;2000年01期
2 薛鸾,胡建东;不同的环磷酰胺冲击方案对狼疮性肾炎的影响[J];临床荟萃;2000年12期
3 傅辰生,徐元钊,张志刚,陶凤武,廖履坦,郭慕依,丁小强;狼疮性肾炎的预后影响因素[J];上海医科大学学报;2000年05期
4 邢安,陈利宏,王强;狼疮性肾炎诊治中白介素-6、白介素-8测定的意义[J];安徽中医临床杂志;2000年05期
5 钟应雄;中西医结合治疗狼疮性肾炎58例疗效观察[J];中国医师杂志;2000年03期
6 杨文凭,梁萌;中西医结合治疗12例狼疮性肾炎临床分析[J];福建医药杂志;2000年05期
7 卢家强,李志平,黄建强,黄毓东,郭禹标,谢灿茂;狼疮性肾炎患者与健康人肺功能比较[J];广东医学;2000年11期
8 刘杰,陈小珍,王英杰;抗Sm抗体对诊断狼疮性肾炎的临床意义[J];河北医药;2000年12期
9 连学坚;狼疮性肾炎并急性肾衰治疗体会(附16例报告)[J];河南医药信息;2000年02期
10 肖春玲,方卫东;中药配合激素、环磷酰胺治疗狼疮性肾炎22例报告[J];江西医学院学报;2000年03期
11 梁兰青,冯维,刘阳;15例狼疮性肾炎的临床与病理分析[J];西北国防医学杂志;2000年01期
12 范兴忠,李新东,潘宝安,李世荣,徐新伟;尿白介素-8检测在狼疮性肾炎病情判断中的价值[J];免疫学杂志;2001年02期
13 左巍,马东初,刘永海,左伟,陈红,杨志蕃,王丽娜;狼疮性肾炎患者外周血淋巴细胞亚群及活化状态的研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2001年04期
14 周锦;狼疮性肾炎中西医结合的诊断及治疗[J];浙江中医学院学报;2001年03期
15 张丽华;53例型狼疮性肾炎治疗观察[J];福建医药杂志;2001年01期
16 唐平,黄荣璋;中西医结合治疗狼疮性肾炎20例[J];福建医药杂志;2001年03期
17 庞学丰;中医辨证结合西药治疗狼疮性肾炎疗效观察[J];广西中医药;2001年05期
18 李力,陶新朝,杨歌明,罗卫东,张萍;中西医结合治疗狼疮性肾炎23例[J];河北中医;2001年04期
19 李玉堂,刘学耀;中西医结合治疗难治性狼疮性肾炎18例[J];湖北中医杂志;2001年07期
20 吴杏,汪涛,李惠群,叶任高,杨念生;中西医结合治疗148例重症狼疮性肾炎的临床报道[J];中国中西医结合肾病杂志;2001年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郎道国;刘建国;;中西医结合治疗狼疮性肾炎55例疗效分析(摘要)[A];第十九次全国中医肾病学术交流会论文汇编[C];2006年
2 罗萍;卢雪红;顾华;;60例狼疮性肾炎的临床与病理分析[A];2009中国中西医结合系统性红斑狼疮研究学术会议资料汇编[C];2009年
3 庞学丰;刘欢;吴燕红;蒙宇华;;不同方案治疗狼疮性肾炎的疗效分析[A];2009中国中西医结合系统性红斑狼疮研究学术会议资料汇编[C];2009年
4 高文凯;陆莉莉;王新婷;;狼疮性肾炎患者焦虑抑郁症状的调查及其心理干预[A];2009中国中西医结合系统性红斑狼疮研究学术会议资料汇编[C];2009年
5 王新婷;高文凯;陆莉莉;;狼疮性肾炎患者心理健康状况分析及护理[A];2009中国中西医结合系统性红斑狼疮研究学术会议资料汇编[C];2009年
6 王新婷;陆莉莉;高文凯;;系统性红斑狼疮性肾炎的中西医结合治疗及护理[A];2009中国中西医结合系统性红斑狼疮研究学术会议资料汇编[C];2009年
7 童宇武;;狼疮性肾炎的治疗[A];玉溪市第十三届内科学术年会论文集[C];2009年
8 章海涛;;狼疮性肾炎治疗的新趋势[A];中华医学会肾脏病学分会2010学术年会专题讲座汇编[C];2010年
9 庞学丰;刘欢;吴燕红;蒙宇华;龙朝阳;;不同方案治疗狼疮性肾炎的疗效分析[A];全国第八届中西医结合风湿病学术会议论文汇编[C];2010年
10 何珍华;;狼疮性肾炎的诊断和进展(综述)[A];第六届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周健光;高迁移率族蛋白1在小鼠狼疮性肾炎中的表达[D];浙江大学;2007年
2 边琪;不同病理类型狼疮性肾炎淋巴细胞亚群的变化及临床意义[D];第二军医大学;2008年
3 栗霄立;狼疮性肾炎易感基因在小鼠模型中的定位及筛选[D];中国医科大学;2007年
4 李艳秋;狼疮性肾炎易感基因的定位和研究[D];中国医科大学;2004年
5 沈淑琼;普乐可复治疗狼疮性肾炎的前瞻性临床研究[D];第二军医大学;2005年
6 王晓栋;WNT信号通路在狼疮性肾炎中的异常表达[D];上海交通大学;2012年
7 丁涵露;狼疮性肾炎PD-L1表达及其基因转染的实验研究[D];第三军医大学;2005年
8 李春雯;肾复康治疗狼疮性肾炎作用机制的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2006年
9 封晓娟;HMGB1在狼疮性肾炎肾小球系膜细胞增殖中的作用及机制[D];河北医科大学;2014年
10 张霞;基于数据挖掘的艾儒棣教授治疗狼疮性肾炎经验总结[D];成都中医药大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵亚;狼疮性肾炎的中西医结合研究进展[D];成都中医药大学;2007年
2 陶琼;中西医结合治疗狼疮性肾炎的临床研究[D];湖北中医药大学;2010年
3 周赛;中西医结合治疗狼疮性肾炎临床分析[D];广州中医药大学;2011年
4 伍巧源;血管内皮细胞生长因子的表达与狼疮性肾炎关系的研究[D];广西医科大学;2003年
5 龙利;中西医结合治疗狼疮性肾炎的疗效观察[D];湖北中医学院;2004年
6 杨珊;狼疮性肾炎危险因素的临床分析[D];新疆医科大学;2007年
7 张晓娟;中西医结合治疗狼疮性肾炎的临床研究[D];广州中医药大学;2008年
8 陈川;中西医结合治疗狼疮性肾炎临床观察[D];湖北中医药大学;2012年
9 王丽娜;狼疮性肾炎患者左心结构与功能改变的多因素分析[D];新疆医科大学;2012年
10 刘兴花;40例狼疮性肾炎患者临床与病理分析[D];山西医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 尹德海;治疗狼疮性肾炎有误区[N];健康报;2006年
2 高铭华本报记者 唐先武;我科学家成功应用多靶点疗法治疗重型狼疮性肾炎[N];科技日报;2008年
3 驻沪记者 魏赟;我国首只治疗狼疮性肾炎药物获批上市[N];医药经济报;2009年
4 本报记者 慕欣;治疗狼疮性肾炎,不止于激素和细胞毒药物[N];医药经济报;2011年
5 尹德海;中西医结合治疗狼疮性肾炎[N];健康报;2006年
6 ;治狼疮性肾炎防三个误区[N];健康时报;2007年
7 梅世雄 高铭华;我国“重症狼疮性肾炎”治疗轰动国际医学界[N];医药导报;2008年
8 据《现代实用医学》;狼疮性肾炎的治疗原则及目标[N];中国医药报;2001年
9 张旭;狼疮性肾炎药物研究进入3期临床[N];中国医药报;2007年
10 高铭华仲崇山;滥用抗生素可诱发重症肾炎[N];新华日报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978