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慢性应激抑郁症大鼠海马中c-jun的表达

满力  
【摘要】: 前言 抑郁症是情感性精神障碍的主要类型,是危害人类身心健康的常见病、多发病,是一个全球性的主要精神问题,具有明显的复发倾向或趋于慢性化,自杀率约10%-15%,抑郁症预后绝非良好。而抑郁症也并非完全的功能性精神障碍,相当部分确有其器质性基础。应激性生活事件尤其是慢性不可知性应激是抑郁症的明显促发因素。应激引起机体产生一系列生理反应,其中最主要的下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)激活,导致糖皮质激素(GC)分泌增加,引起GC血症。海马是GC作用的主要靶器官之一,对应激反应非常敏感且易损。慢性应激损害海马神经元结构和功能,可能与抑郁症、创伤后应激障碍(PTSD)等多种精神疾病有密切的关系。应激引起海马损害的机制尚不十分清楚,近年来,即刻早基因(IEG)中的c-fos、c-jun已成为研究应激性脑损伤的重要手段,并用作脑细胞功能的示踪标志。随着神经分子生物学的兴起,从分子和基因水平探讨神经活动的规律已成为目前生命科学研究的一个热点。即刻早基因(IEGs)包括c-fos、c-jun在内的近百个成员,目前对IEGs中c-fos和c-jun家族研究较为深入。有关c-jun、c-fos原癌基因表达的研究,一般都是急性应激实验,慢性应激时中枢神经系统内IEG表达的研究很少,慢性应激性抑郁大鼠海马c-fos基因的表达已有相关研究,而c-jun表达的变化尚无报道。 本研究以c-jun的表达作为海马神经元功能的标志,旨在研究慢性应激抑郁症大鼠海马神经元功能活性的改变;探讨慢性应激时c-jun表达与海马结构和功能改变的关系,希望能进一步揭示抑郁症的发病机制,为抑郁症的深入治疗提供依据。 材料和方法 一、实验材料 1.实验动物 采用青年雄性Wistar大鼠36只,体重200-300g。由中国医科大学实验动物中心提供。 2.主要试剂兔抗大鼠e一un多克隆抗体,生物素标记的山羊抗兔I盼, sABC免疫组化试剂盒,DAB显色剂,均购于Boster公司。实验仪器YSD- 4G型药理生理实验多用仪(安徽蚌埠医学院无线电二厂);Meta Morp丫 Cool Snap召Ax70计算机图像分析系统。 二、实验方法 1.动物分组 将实验大鼠适应环境饲养1周,称重,并采用open一field法(开场实 验)测定其行为。然后随机分为急性应激组(A组)和抑郁模型组(C组), 每组各18只。两组大鼠在体重和旷场行为分析中各指标均无显著差异。 2.应激过程 急性应激组(A组)试验第1一21天不给与任何刺激,笼养,每笼6只。 慢性应激组(C组)大鼠单笼喂养,每笼1只。试验第1一21天内接受7种 不同的刺激:电击足底、冰水游泳、摇晃、热应激、夹尾、禁水、禁食。每天给 与一种刺激,各种刺激累计使用2一3次。第21天末,两组大鼠再次进行 。Pen一fie1d(开场行为)评分。第22天将两组大鼠冰水强迫游泳smin。 3.灌流取材与切片 所有实验大鼠在第22天游泳应激后第omin、30而n、lh、3h、sh、sh等不 同时间各随机选取3只,用戊巴比妥钠行腹腔麻醉后,经左心室快速注入 37℃生理盐水200血,继之灌入4℃的4%多聚甲醛溶液300而,然后剥离 脑,修块,后固定48小时以上,梯度乙醇脱水,石蜡包埋后,行冠状切片。 4.JUN蛋白免疫组化检测 采用ABC免疫组化法检测片中的 JUN蛋白。 5.图像分析 每只大鼠选取海马切片2张,在计算机图像分析系统上分别测量双侧 海马CA3区、DG(齿状回)内JUN阳性细胞相对切面面积比(SA)和平均 目标灰度值(GD)。 6.统计学处理 采用SPSSI 1 .0统计软件对数据进行分析。 实验结果 一、开场行为和体重的评定 实验前两组大鼠的体重、中央格停留时间、水平运动、垂直运动、修饰次 数、粪便粒数等方面均无差异(P0.05)。通过21天的慢性不可预见中等 强度的应激后,与对照组A相比,应激抑郁模型组大鼠中央格停留时间延 长,水平穿越格数减少,竖立次数减少,修饰次数减少,粪便粒数增多,体重 减轻(p0.01一0.05). 二、光镜下海马神经元 光镜下观察,刊N蛋白免疫反应物质呈棕黄色颗粒状,位于细胞核内, 低倍镜下为棕色小圆点。在海马CAI一CA3和DG等部位均有川N蛋白的 表达,但以CA3区和DG内染色最强。光镜下观察,A组大鼠海马CA3区 锥体细胞和DG颗粒细胞排列整齐、密集。而C组大鼠CA3区锥体细胞排 列稀疏,细胞有的呈长圆形或梭形,数量有所减少,细胞间隙增大;DG颗粒 细胞数量减少。 三、海马中JUN蛋白的表达 1.A组(急性应激组)①大鼠海马CA3区与omin相比,30而n面积比 开始升高,但差异不显著。lh、3h、sh面积比显著增加(均为P0.01),sh 达高峰;lh、3h、sh、sh灰度值明显降低(均为P0.01),波谷出现在3h。② 在DG,与Omin相比,lh、3h、sh面积比增加(lh、3h、shP0.01),3h达高 峰;灰度值3h、sh、sh均显著降低(P百.01)波谷出现在3h。 2.C组(慢性应激抑郁组)①在海马CA3区,与omin相比,5h面积比 增加(P0.01),峰值出现在sh;各检测时点的灰度值与O而n相比均无显 著差异,无明显表达高峰。②在DG,与O而n相比,lh、3h面积比明显增加 (P0.01),峰值出现在3h


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