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口腔鳞癌端粒酶活性的表达及其生物学调控的实验研究

张桂荣  
【摘要】:实验目的 口腔粘膜鳞癌在人群中有较高的发病率,对其恶性程度进行客观的评价将有助于提高患者的诊断率和生存率。在一些肿瘤细胞中则能检测到端粒酶,近年来围绕这一问题展开了大量的研究,但是端粒酶与恶性肿瘤之间是否平行还有着很大的分歧:肿瘤细胞与端粒酶之间究竟是何种关系;端粒酶基因在肿瘤细胞恶性化演变过程中的激活机制;端粒酶在肿瘤发生发展过程中的表达规律;端粒酶活性高低与临床分期和病理分级的关系;端粒酶活性与细胞周期的关系;端粒酶抑制剂是否可作为抗肿瘤的药物。 本实验应用TRAP-PCR-ELISA方法及免疫组化SP法对口腔鳞癌、癌旁组织及正常口腔粘膜的端粒活性和PCNA检测,分析其与口腔粘膜鳞状细胞癌发生、发展的关系;探讨细胞周期素A与hTRT在口腔粘膜鳞癌不同阶段及癌前病变中的关系;应用端粒酶抑制剂:端粒酶模板区硫代型反义寡核苷酸片段(antisense oligonucleotides,AS_ONS)作用于人源性舌癌细胞系Tca8113细胞,观察它们对肿瘤细胞生长的影响及肿瘤细胞端粒酶活性的变化,为端粒酶抑制剂的临床应用提供实验依据。 实验方法 1.组织标本端粒酶活性检测 TRAP-PCR-ELISA法,取上述PCR产物经包被、变性、杂交、酶联抗体、底物反应、显色等步骤后,测定在波长450nm的吸收度A,以A0.20为阳性判断标准。 2.PCNA免疫组化染色 采用链霉素生物蛋白过氧化物酶(SP)法免疫组化技术,一抗PC-


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