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静脉注射骨髓基质细胞增加脑梗死大鼠血管内皮生长因子的表达

石艳玲  
【摘要】:目的 骨髓基质细胞(MSCs)是具有多向分化潜能的非造血干细胞。研究发现骨髓基质细胞注射入脑内,可迁移至缺血组织,并分化成为神经元样细胞与胶质细胞,同时分泌多种细胞因子,而这些细胞因子在脑损伤修复过程中将起到重要的作用。血管内皮生长因子(VEGF)作为血管内皮细胞有丝分裂原,既参与血管的发生又参与血管的新生,研究报道大鼠脑缺血后缺血脑组织中VEGF表达增加,并影响脑梗死患者的预后。本试验的目的是将骨髓基质细胞静脉注射给大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,然后观察注射的细胞在脑内的分布以及脑内VEGF的表达,以探讨骨髓基质细胞治疗脑梗死的机制。 方法 采用Longa线栓法建立45只大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型:用直径0.26mm的尼龙线阻塞大脑中动脉,2小时后拔除尼龙线以实现大脑中动脉闭塞再灌注。动物模型随机分成MSCs治疗组、盐水对照组、空白对照组,每组又分3天、7天、14天三个时间点。为证明脑梗死病灶的形成,大脑中动脉闭塞再灌注后,摘除脑组织,立即用Trc染色,活组织被染为红色,梗死组织不着色。 参考Friedenstein的方法,从2月龄Wistar大鼠后肢骨髓分离、获取骨髓基质细胞,过滤、离心后,细胞用20%DMEM(Dolbecco modified Eagle medium,DMEM,同时含有20%胎牛血清+青霉素100~u/ml+链酶素100μg/ml)、种植密度2×10~5个细胞/cm~2接种于25cm~2塑料培养瓶中,在37℃、5%CO_2、饱和湿度的培养箱中培养。倒置相差显微镜下观察细胞生


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