核因子κB在TNF-α诱导宫颈癌细胞凋亡过程中作用的研究

【摘要】：目的 宫颈癌是一种恶性度极高的常见肿瘤,目前宫颈癌的治疗除手术和放疗外,化疗也普遍应用。化疗药物一般通过多种途径诱导宫颈癌细胞发生凋亡,达到消灭肿瘤细胞的目的。诱导肿瘤细胞凋亡是化疗药物抗肿瘤的主要机理所在,而凋亡受阻是肿瘤对化疗产生耐药的主要原因之一。细胞凋亡是受一系列基因调控的复杂过程,近来一些学者发现NF-κB活化在抵抗细胞凋亡中起重要作用。目前有研究发现多种化疗药物在杀伤肿瘤细胞同时能够诱导核转录因子NF-κB活化。目前已经证明核因子κB(NF-κB)是一种细胞保护性因子,可上调“保护性或抗凋亡蛋白”,在肿瘤发生过程中可提高肿瘤细胞生存率,抑制细胞凋亡,使肿瘤细胞产生耐药。在临床上宫颈癌患者在化疗过程中对化疗药物诱导的凋亡产生拮抗,除了已知的各种耐药因素外,是否与NF-κB活化也存在一定的关系,目前尚无明确的结论。本研究探讨干扰素γ(IFN-γ)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及TNF-α诱导NF-κB活化的影响,旨在探讨宫颈癌Hela细胞早期耐药的原因。 方法 宫颈癌Hela细胞系由中国医科大学细胞生物学教研室提供,常规培养传代。取指数生长期的细胞以3×10~5/ml,接种于96孔培养板中,培养2小时后,细胞贴壁,分为空白对照组(不加TNF-α)和实验组(加TNF-α,购自美国R D公司)终浓度分别为(5ng/ml,10ng/ml,15ng/ml)作用不同时间分为6,12,24h,每组设三个复孔。指数生长期的细胞以3×10~5/ml与干扰素γ(终浓度100u/ml)共培养2h,再加入终度与上述相同的TNF-α继续培养3h,设三个复孔。分别用于进行MTT检测,细胞爬片和提取蛋