WT1反义寡核苷酸对白血病微小残留病的体外净化作用

【摘要】：前言 随着新化疗药物的应用以及造血干细胞移植等治疗方法的开展,急性白血病的完全缓解率已得到很大提高,生存期明显延长,但完全缓解患者体内存在的微小残留病仍是白血病复发的主要根源。造血细胞的增殖受多种因子的调控,白血病的发生与基因的异常表达有关。Wilms瘤基因(WT1)位于染色体11p13位点,是具有转录抑制和激活双重功能的调节因子,可能作为调控造血细胞增殖和/或分化基因的转录抑制剂,在白血病的发生、发展及预后中起一定的作用。 反义寡核苷酸(ASO)是与mRNA互补的核苷酸序列,通过影响基因转录、mRNA剪切及抑制mRNA的翻译等环节发挥特异性封闭靶基因表达的作用。 本实验目的是通过WT1反义寡核苷酸抑制WT1基因的表达,观察微小残留病模型及患者基因表达的变化,进一步研究WT1基因在白血病发生发展中的作用,探讨WT1反义寡核苷酸在白血病微小残留病反义治疗中的应用。 实验材料 1.试剂:Ficoll淋巴细胞分离液、Trizol、氯仿、异丙醇,dNTP(四种脱氧核糖核苷酸)、RNA酶抑制剂、逆转录酶、Taq酶、RPMI1640完全培养液。上述试剂均由传染病实验室提供。引物、寡核苷酸由Takara公司合成。 2.仪器:CO_2培养箱、高速冷冻离心机、紫外分光光度仪、PCR扩增仪、电泳仪、自动电泳凝胶成像分析仪、-152℃低温冰箱、-30℃低温冰箱。