颈内动脉注射pLXSN-bcl-2cDNA对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积、神经细胞凋亡及其相关基因表达的影响

【摘要】：目的 凋亡是脑缺血后神经元的死亡形式之一。基因抗凋亡治疗成为脑梗死实验研究的热点和难点之一。凋亡受bcl-2(B-cell lymphoma/leukemia-2 gene)等凋亡相关基因调控,国外进行了大量转bcl-2基因治疗脑梗死的实验研究,证实bcl-2基因在神经保护方面起重要作用。目前神经系统基因治疗多采用脑实质和脑室系统立体定向注射的方法,但由于创伤性大和外源基因扩散容积有限,很难应用于人类。经血管途径转基因治疗可以增加基因治疗靶向性,减少脑损伤,是理想的基因治疗途径。我们实验研究用质粒pLXSN作为载体介导人bcl-2cDNA经颈内动脉注入大鼠MCAO模型,探讨质粒pLXSN介导人bcl-2基因经血管途径在缺血再灌注损伤血脑屏障破坏后进人脑内表达,对大鼠局灶性脑缺血后脑梗死体积、神经细胞凋亡及其相关基因bcl-2、bcl-xl、bax表达的影响。为寻找方便、无创伤的转基因治疗脑梗死方法提供实验依据。 方法 健康Wistar雄性大鼠99只,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞2小时再灌注模型(MCAO),随机分为1组MCAO组,2组MCAO+空质粒PLXSN组和3组MCAO+PLXSN-bcl-2组,每组各33只。每组又随机分为脑缺血2h再灌注24h、48h和72h三个亚组,每亚组11只。再灌注3小时后2、3两组分别经颈内动脉注射质粒PLXSN、PLXSN-bcl-2。采用TTC染色法计算脑梗死体积,原位末端TUNEL法标记凋亡细胞,免疫组织化学方法检测bcl-2、bcl-xl、bax蛋白表达。