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KXI对酒精性肝病大鼠TNF-α、PAI-1的影响

王颖  
【摘要】: 目的 酒精性肝病(Alcoholic Liver Disease,ALD)的发病与多种因素有关。目前研究较多的有:遗传因素;免疫学因素;氧化应激等。其中细胞因子在酒精性肝病发病机制中的作用越来越受到重视。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是重要的细胞因子,在ALD的发病和发展过程中起到重要的作用。纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor type 1,PAI-1)在化学性肝纤维化中的表达已有报导,但在ALD中尚缺乏相关研究。本实验通过建立酒精性肝病大鼠模型,观察不同时期大鼠肝脏的病理、肝纤维化程度与TNF-α、PAI-1定位和动态变化,进一步揭示ALD的发病机理,同时也观察抗纤复方Ⅰ号(Kang Xian Fu FangⅠ,KXⅠ)对其表达的影响,为进一步探讨酒精性肝病的作用机制、预防和临床治疗提供帮助。 实验方法 1.酒精性肝病动物模型的制备 雄性Wistar大鼠,体重160-190克,随机分为三组,每组21只:正常组,正常饮食,给予生理盐水2.0ml/只,日三次灌胃,共12w。酒精组,给予乙醇日三次灌胃,共12w。其中0-4w,400ml/L乙醇8 g/k g/d;5-8w,500m l/L乙醇9 g/k g/d;9-12w,500m l/L乙醇10 g/k g/d。KXⅠ组,在给予同酒精组等量乙醇的基础上,给予KXⅠ水煎剂4.0ml/k g/d,日二次灌胃,共12w。 2.肝脏组织病理学检测 实验4w、8w、12w末分批处死动物。固定的肝组织经梯度酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,连续切片5μm行HE染色,光镜下观察肝脏组织病理学的改变。 3.TNF-α、PAI-1免役组织化学染色 采用SABC法。TNF-α、PAI-1抗体均为1:100稀释。结果测定采用病理图象分析仪测定阳性面积积分光密度值。 4.统计学方法 统计学分析采用SPSS11.5软件,比较采用配对t检验。 实验结果 1.肝脏组织病理学改变: 光镜下观察:酒精组4周末出现肝细胞胞质疏松,肝细胞肿胀呈气球样变,伴有肝细胞坏死及炎性细胞浸润;12周末出现脂肪变加重,肝细胞坏死增多,炎细胞浸润明显;KXⅠ组8周末时出现轻度脂肪变,肝细胞坏死及炎性细胞浸润均不明显。 2.肝组织TNF-α、PAI-1免疫组化染色结果: TNF-α、PAI-1的阳性表达主要位于肝脏中央静脉周围细胞的胞浆中。正常组TNF-α、PAI-1基本不表达,随着造模时间的延长,酒精组TNF-α、PAI-1的表达呈进行性的增加;KXⅠ组随着给药时间的延长,TNF-α、PAI-1的表达同酒精组相比有所减弱,与酒精组比较有显著性的差异。 结论 1.酒精性肝病过程中,TNF-α、PAI-1的阳性表达主要位于肝脏中央静脉周围细胞的胞浆中.随着造模时间的延长,TNF-α、PAI-1的阳性表达进行性增强。 2.抗纤复方I号能抑制TNF-α、PAI-1的阳性表达,减少肝细胞凋亡、促进细胞外基质降解,延缓肝纤维化的形成和发展。


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