收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Apigenin对人乳腺癌细胞VEGF表达的影响及相关作用通路

金雪瑛  
【摘要】: Apigenin对人乳腺癌细胞VEGF表达的影响及相关作用通路 目的 乳腺癌是女性主要恶性肿瘤之一,有易复发和多途径转移的特性。虽然,对参与乳腺癌进展的机制并不完全清楚,但越来越多的对于一些自分泌和旁分泌的因子对于乳腺癌发生、发展的作用的研究表明,在乳腺癌的发展过程中,血管内皮生长因子(VEGF)发挥重要作用。抑制VEGF在肿瘤血管生成及生长中的作用已成为乳腺癌治疗的一个重要靶点。低氧诱导因子(HIF-1)是细胞应激缺氧所产生的转录激活因子。HIF-1在人类许多肿瘤中都高表达,HIF-1是由HIF-1α和HIF-1β两个亚单位构成的异质二聚体,其中α亚单位受氧浓度的调节。近来又有研究表明,HIF-1α不单纯受氧浓度的调节。癌基因的突变,如VHL,P53或PTEN功能的缺失,都能诱导HIF-1α的表达。生长因子,细胞因子及其他信号分子都能通过激活PI3K/AKT或MAPK途径而刺激HIF-1α的合成。P13K是一个异二聚体酶,AKT是目前研究较为清楚的下游靶点,传递来自生长因子的生存信号。近来有研究表明VEGF的表达是生长因子的刺激和癌基因的激活通过PI3K/AKT信号传导途径作用于HIF-1α而实现的。Apigenin作为一种有益健康的食物提取物,最近又发现它的抗肿瘤作用,然而其机制尚未明确。在乳腺癌中,PI3K的催化亚单位p110α成倍增高,且P13K催化亚单位的表达与VEGF的表达呈正相关。VEGF和HIF-1α在乳腺癌中都有表达,且VEGF表达与HIF-1α的表达相关,表明在乳腺癌中,HIF-1α导致VEGF的高表达。本研究中使用人乳腺癌MDA-MB-231细胞,对Apigenin的抗肿瘤机制进行了研究,并发现Apigenin明显抑制了MDA-MB-231细胞VEGF与HIF-1α的表达,因此,我们对Apigenin抑制VEGF产生的可能机制进行了研究。 方法 1、应用酶联免疫吸附法检测VEGF在MDA-MB-231细胞中的分泌水平 收集经Apigenin处理(15h)或未处理的该细胞无血清培养基,按VEGF ELISA试剂盒操作要求测定。 2、采用MTT法检测Apigenin对乳腺癌细胞增殖的影响 接种于96孔板的MDA-MB-231细胞,经血清饥饿24h,用不同浓度Apigenin处理15h,按照MTT法的步骤对细胞增殖状态进行检测。 3、应用RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中VEGF mRNA的表达水平 经不同浓度Apigenin处理6h的细胞,采用Trizol试剂提取标本中的总RNA,在含溴化乙锭(EB)的1%琼脂糖凝胶上电泳检测RNA样品的完整性。用AMV一步法进行RT-PCR扩增。 4、采用双荧光素酶系统检测MDA-MB-231细胞VEGF的转录活性 接种到6孔板的MDA-MB-231细胞,用Lipofectamine~(TM)2000,pRL-TK(作内参)和pWAP11wt,或以pRL-TK(作内参)和pWAP11wt和pCEP4-HIF-1α共转染细胞12h。分别经血清饥饿24h,不同浓度Apigein处理15h,被动裂解液提取细胞总蛋白质。双荧光素酶报告分析试剂盒进行发光,荧光检测仪进行发光定量。通过转入pCEP4-HIF-1α来观察HIF-1α逆转Apigenin抑制MDA-MB-231细胞VEGF转录活性的作用。 5、应用蛋白质印迹方法检测Apigenin对MDA-MB-231细胞中HIF-1α,p-AKT,p-ERK1/2,p53表达的时间依赖性和剂量依赖性效应 不同处理的细胞,用裂解液抽提。含有等量蛋白的细胞裂解液用样品缓冲液溶解后,置于10%SDS-PAGE电泳分离,转移至硝酸纤维素膜,室温下封闭,过夜;分别加入特异的抗体,孵育2h,0.2mol/L NaOH洗膜去除膜上抗体,加碱性磷酸酶标记的二抗,孵育2h,用碱磷酶显色液显色,用凝胶成像仪成像。 结果 1、Apigenin抑制了人乳腺癌细胞VEGF分泌 ELISA数据结果显示,用不同浓度Apigenin处理15h后,MDA-MB-231细胞培养基中的VEGF水平显著减少,而且这种抑制效应具有剂量依赖性。 2、Apigenin抑制人乳腺癌细胞VEGF mRNA表达 RT-PCR结果显示,在无血清状态下用Apigenin处理MDA-MB-231细胞6h,5μM Apigenin降低了VEGF mRNA表达水平,而随Apigenin浓度升高,VEGFmRNA表达水平降低更显著。 3、MTT结果显示 用Apigenin处理细胞15h,对MDA-MB-231细胞的增殖没有显著影响,这一结果提示Apigenin对人乳腺癌细胞VEGF蛋白分泌的抑制不是通过抑制细胞增殖实现的。 4、通过分析Apigenin对VEGF启动子报告基因pMAP11wt的作用,结果显示 Apigenin抑制了人乳腺癌细胞pMAP11wt的转录活性,并且随Apigenin剂量的增加,抑制作用更加显著。 5、Apigenill抑制了人乳腺癌细胞HIF-1α蛋白的表达 MDA-MB-231细胞中HIF-1α蛋白表达被Apigenin所抑制,并存在剂量和时间依赖性。Apigenin既抑制了HIF-1α基因的转录,又降低了HIF-1α蛋白的稳定性。 6、Apigenin诱导了人乳腺癌细胞中p53蛋白的表达,抑制人乳腺癌细胞中AKT的磷酸化,对ERK1/2的磷酸化并没有明显影响。 结论 Apigenin可能通过降低VEGF启动子的转录活性,抑制VEGF mRNA的表达,降低分泌至胞外的VEGF蛋白水平而抑制人乳腺癌细胞VEGF的表达,并且这一作用与该细胞的增殖状态无关;Apigenin可能通过PI3K/AKT信号通路和诱导p53表达,降低HIF-1αmRNA的水平以及降低HIF-1α蛋白的稳定性而抑制HIF-1α的表达,进而下调了VEGF的表达。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 孙红艳;邹天宁;伍治平;;VEGF-C在乳腺癌淋巴转移中作用的研究进展[J];肿瘤学杂志;2007年04期
2 韩晖;林舜国;许春森;赵文新;陈大良;郑宇辉;杨映红;;环氧化酶-2、血管内皮生长因子在乳腺癌组织中表达及其对血管生成的影响[J];中华乳腺病杂志(电子版);2008年06期
3 张辉;陈艳昕;刘庆滨;;乳腺肿瘤组织中VEGF与PCNA的表达及其意义[J];中国医师进修杂志;2006年29期
4 金雪瑛;任常山;;芹菜素抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞血管内皮生长因子表达[J];中国现代医学杂志;2007年04期
5 裴素霞;齐贵胜;;乳腺癌组织中Cyclin D1和VEGF的表达及意义[J];山东医药;2010年15期
6 李贵新;郭璐;李鹏鑫;路中;孙秀梅;马长庚;刘康;刘锦;;乳腺癌组织p53和nm23及VEGF表达相关性的研究[J];中华肿瘤防治杂志;2010年12期
7 金雪瑛;任常山;;芹菜素对人乳腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响及作用机制[J];中华肿瘤杂志;2007年07期
8 谢玉妍;黄新锋;易先平;王晓鸿;;血管内皮细胞生长因子在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及意义[J];中国实用医药;2008年30期
9 张禄尧;孙伟;郭璐;;PCDGF在乳腺癌中的表达及其对肿瘤血管生成的影响[J];现代生物医学进展;2009年22期
10 王刚;赵三平;邹玉环;赵建红;史小丹;丁梅;杨璟;徐卫国;;乳腺组织癌变过程中VEGF表达及其与血管生成的相关性[J];山东医药;2010年47期
11 陆云飞!南宁市(530027),林进令!南宁市(530027),曾健!南宁市(530027),廖清华!南宁市(530027),凯依塔!南宁市(530027);nm23、p21~(ras)、VEGF及ER在乳腺癌的表达及其与预后的关系[J];肿瘤防治杂志;2000年06期
12 刘锦;李贵新;路中;孙秀梅;魏素臻;马长庚;;HIF-1α,VEGF的表达及与乳腺癌生物学行为的关系[J];潍坊医学院学报;2009年01期
13 尤捷;郭贵龙;陈雪敏;瞿金妙;张虎祥;王群姬;;环氧化酶-1在乳腺癌中的表达及其意义[J];实用医学杂志;2008年10期
14 韩晖;赵文新;林舜国;许春森;杨映红;郑宇辉;;血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-2在乳腺癌中的表达及其相关性的意义[J];中国实用医药;2008年30期
15 贾岩峰;张文清;刘杰;张香梅;;血清中血管生长因子以及生长抑素在乳腺癌中的表达[J];中国实用医药;2010年20期
16 张卓军;;血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及其与腋窝淋巴结转移的关系[J];海南医学院学报;2006年04期
17 申培红;申培新;吕新泉;张云汉;;血管内皮生长因子、上皮性钙黏蛋白、基质金属蛋白酶在乳腺肿瘤中的表达及其与浸润转移的关系[J];中华实用诊断与治疗杂志;2009年03期
18 刘雅洁;王树滨;郑涛;许瑞莲;夏俊贤;;乳腺癌微血管密度和血管内皮生长因子表达的临床意义[J];中国现代医药杂志;2006年07期
19 韩明强;;Her-2和VEGF在乳腺癌组织中的表达及其相关性[J];山东医药;2009年01期
20 王日雄;施烯;林学德;林建华;;COX-2及VEGF蛋白在大鼠乳腺癌骨移植瘤中的表达及意义[J];中国癌症杂志;2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴国昌;;1H-MRS在乳腺肿瘤中的应用研究[A];2010中华医学会影像技术分会第十八次全国学术大会论文集[C];2010年
2 纪滨;金颖;马庆杰;;整合素α_vβ_3介导的~(99)Tc~m-3PRGD_2在乳腺肿瘤中的实验研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
3 杨振贤;李平;;64层螺旋CT成像技术对乳腺肿瘤的诊断价值[A];2010中华医学会影像技术分会第十八次全国学术大会论文集[C];2010年
4 张渊;江泉;张云霄;陈剑;顾晓鸣;;SonoLiver软件参数成像在乳腺肿瘤超声造影中的应用研究[A];中国超声医学工程学会第三次全国浅表器官及外周血管超声医学学术会议(高峰论坛)论文汇编[C];2011年
5 姚华;林德贵;张中文;王惠川;任晓明;;E-cadherin在犬乳腺肿瘤中的表达及意义[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(上册)[C];2010年
6 唐爽;徐莲;黄钢;;类泛素蛋白酶2(SENP2)通过抑制AKT磷酸化调节乳腺肿瘤糖代谢[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
7 林森;卓睿;;乳腺癌肉瘤囊性变并肺转移1例报告及文献复习[A];第十一届全国中医及中西医结合乳腺病学术会议论文集[C];2009年
8 杭兰甫;;乳腺肿瘤76例和乳腺增生278例治疗体会[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年
9 姚宏;梁晓燕;王虹;平苏萍;张庆升;;survivin和雌激素受体亚型在乳腺肿瘤组织中的表达及其临床意义[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
10 吴冰;徐贵发;赵秀兰;陈兆堂;迟爽;;维生素E对DMBA诱导的大鼠乳腺肿瘤的抑制作用[A];中国营养学会第八次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 金雪瑛;Apigenin对人乳腺癌细胞VEGF表达的影响及相关作用通路[D];中国医科大学;2007年
2 李艳;糖尿病大鼠视网膜VEGF、PEDF表达与神经细胞及血—视网膜屏障损伤的研究[D];天津医科大学;2006年
3 李曦铭;基因重组hVEGF165腺相关病毒的构建及其在间充质干细胞和心肌细胞中的表达[D];天津医科大学;2006年
4 孔怡淳;氧诱导视网膜病变的发病机制研究[D];天津医科大学;2006年
5 陶波;喉癌前病变中医证候与iNOS和VEGF表达关系及金喉片治疗的研究[D];广州中医药大学;2006年
6 方秀统;BMP-2和VEGF-165双基因共转染大鼠骨髓基质干细胞体内成骨的实验研究[D];吉林大学;2006年
7 崔正军;腺病毒载体介导的反义VEGF_(165)基因治疗人皮肤恶性黑色素瘤的实验研究[D];四川大学;2004年
8 杨宏辉;VEGF转染对骨髓间质干细胞及对粥样硬化动脉TFPI的影响[D];中南大学;2007年
9 李建峰;实验性脊髓空洞前状态形成机制的分子生物学研究[D];河北医科大学;2005年
10 王琦;正常胰腺和胰腺癌多层螺旋CT灌注成像的临床及实验研究[D];中国医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 辛华;超声造影技术在乳腺肿瘤鉴别诊断中的应用价值研究[D];山东大学;2006年
2 丘晓云;抑癌基因BRCA1及雌激素受体在乳腺癌中的作用[D];广西医科大学;2005年
3 宋永蔚;肿瘤浸润性树突细胞与血管内皮生长因子在乳腺癌组织中的表达及其意义的研究[D];大连医科大学;2009年
4 史伟峰;乳腺肿瘤细胞分子的表达及其与肿瘤细胞生物行为相关性的研究[D];苏州大学;2002年
5 骆仙芳;保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构干预作用的研究[D];浙江大学;2005年
6 冯建军;COX-2及VEGF在人膀胱移行细胞癌中的表达及意义[D];福建医科大学;2005年
7 冯青俐;肝细胞生长因子与急性冠脉综合征的相关性研究[D];郑州大学;2005年
8 王文栋;人子宫内膜癌中血管内皮生长因子和雌激素受体的表达及相关性探讨[D];山东大学;2005年
9 张辉;VEGF, PCNA蛋白表达与垂体腺瘤的生物学行为关系的研究[D];山东大学;2005年
10 许国星;膜引导骨再生过程中VEGF表达的实验研究[D];山东大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 上海第二军医大学附属长征医院 张军初 金志军 整理 王根华;怀孕加速乳腺肿瘤生长[N];健康报;2009年
2 舒惠娟;市一医院乳腺肿瘤诊治“二合一”[N];自贡日报;2010年
3 胡晓震 本报主任记者 叶青;针孔里切除乳腺肿瘤[N];沈阳日报;2010年
4 风信;乳腺肿瘤生长与一蛋白相关[N];医药经济报;2001年
5 记者 顾磊;长春启动“关爱贫困母亲”慈善救助项目[N];人民政协报;2009年
6 张中桥;卵巢癌与血管内皮生长因子有关[N];民族医药报;2000年
7 本报记者 赵沙菲;有一种幸福叫“慈善”[N];长春日报;2010年
8 ;小儿肾母细胞瘤血管内皮生长因子的表达及临床意义[N];中国医药报;2003年
9 王珑珑 记者 何剑;在创新中拔节 在厚积中喷薄[N];南昌日报;2010年
10 ;欲善其事 先利其器[N];中国医药报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978