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蚯蚓纤溶酶的分离纯化、乳膏的制备及其临床疗效观察

代萌  
【摘要】: 前言 蚯蚓又名地龙,是一种低等环节动物,具有很强的伤口愈合及再生能力。它作为一味古老的中草药,应用非常广泛,早在《本经》、《别录》及《本草纲目》等中医古籍中就有记载。具有清热止痉、平肝熄风、通经活络、平喘利尿及外治痈肿疮毒等作用。2006年最新版《中药大辞典》中记载的它的药理作用为:①具有抗凝血作用,现已经制成抗栓口服剂及针剂。②具有抗癌作用,正在处于研究阶段③具有抗炎、镇痛及促进伤口愈合的作用,通过动物实验初步证实了蚯蚓纤溶酶EFE(earthworm fibrinolytic enzyme)具有抗炎效果,其抗炎作用相当于5%氢化考的松。④其他作用。本实验基于以上研究成果,主要检验EFE是否在治疗能够在引起炎症的皮肤病方面有确切疗效。 实验目的 1、EFE粗品的分离纯化 2、EFE乳膏的制备 3、EFE乳膏对慢性湿疹、脂溢性皮炎、手足皲裂症、过敏性皮炎及神经性皮炎等五种皮肤病的临床疗效观察。 材料与方法 一、对粗品进行三步层析 应用由美国GE公司生产的(?)KTA Purifier100系统而达到分离纯化的目的。具体步骤为: 1、EFE粗品的Sephadex G-75凝胶过滤层析。最终获得了最有活性、浓度最大且相对纯度较大的D5峰组分,其中包含3种蛋白质成分,相对分子量分别为30KD、33KD、41KD。 2、D5峰组分经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进一步分离。最终获得分子量为33KD、41KD的活性峰D5-S2。 3、D5-S1峰组分经Phenyl-Sepharose Fast Flow疏水层析进一步分离纯化。 二、EFE乳膏的制备及其质量控制 1、采用普通制备乳膏的处方,经无菌操作制备EFE乳膏。 2、分别用豚鼠背部皮肤及家兔的鼻腔为该药品的实验对象,进行皮肤刺激实验。 3、药物稳定性试验:将EFE乳膏常温放置六个月,观察外观性状。将EFE冻干粗品常温放置六个月,测其活性。 三、EFE乳膏治疗5种皮肤病的临床疗效 1、临床资料:总病例:75,分别患有慢性湿疹、脂溢性皮炎、手足皲裂症、过敏性皮炎及神经性皮炎。 2、治疗方法:EFE乳膏涂抹于患处一到两周。 3、参照皮肤科对上述5种疾病的诊断标准。 4、统计EFE乳膏的临床疗效,即有效率。 实验结果 1、经三步层析后结果得到:一种分子量为33KD的成分(蛋白浓度为0.1266mlg/ml,酶活力为226.67usp)。 2、经动物实验及稳定性实验证明:本品对皮肤无刺激性且稳定性好。 3、经临床观察证明:对慢性湿疹、脂溢性皮炎及手足皲裂症具有确切疗效而对过敏性皮炎疗效较差,对神经性皮炎无效。 研究意义 本实验为进一步研究EFE的药理作用及开发新型抗炎药物起到一定促进作用。 结论1、初步建立了由凝胶过滤层析、离子交换层析和疏水相互作用层析纯化EFE活性酶组分的工艺流程。 2、具有抗炎作用的EFE在治疗慢性湿疹、手足皲裂症及脂溢性皮炎等皮肤病具有确切疗效。对神经性皮炎无效,对过敏性皮炎疗效较差。


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