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丹参酮ⅡA注射液对大鼠脑缺血/再灌注损伤的防治作用

马小翠  
【摘要】: 前言 脑缺血/再灌注损伤(Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury,CIRI)是临床上常见的病理过程,例如,发生在休克治疗、心肺脑复苏、脑血管栓塞再通和解除脑肿瘤压迫之后等,严重威胁着患者的生命,对疾病转归有不良影响。目前,对脑缺血/再灌注损伤尚没有确切的防治方法。 神经元特异性烯醇酶(Neuron-Specific Enolase,NSE)是存在于大脑神经元和神经内分泌细胞内参与糖酵解的特异酶,脑神经元损伤后,血清和脑脊液中NSE含量增加,其升高水平与脑损伤程度呈正相关,可作为中枢神经系统损伤的一个敏感性生化指标。 近年来,通过对丹参药理作用的研究发现,丹参对脑缺血/再灌注损伤具有保护作用。在丹参的有效成份中,丹参酮ⅡA是最主要的脂溶性成份。目前关于丹参酮ⅡA防治脑缺血/再灌注损伤的给药时机和给药剂量方面的研究尚属空白。本研究采用在缺血前和再灌注即时给予不同剂量的丹参酮ⅡA,观察血中NSE的变化和脑组织形态学改变,探讨不同的给药时机和给药剂量对脑缺血/再灌注损伤的作用,为临床治疗提供实验依据。 材料与方法 一、动物和手术 健康雄性SD大鼠56只,体重300±25g,由中国医科大学实验动物中心提供。所有实验动物均笼养,任意食水,自然采光,在实验环境中适应3天。将实验动物随机分为对照组和给药组,给药组设定三种给药时机(缺血前30分钟、再灌注即时和缺血前30分钟+再灌注即时)和四种给药剂量(0mg/kg,3.0mg/kg,6.0mg/kg,12.0mg/kg),各实验条件下均采用4只大鼠进行观察。 脑缺血/再灌注损伤模型采用改良四血管阻塞(4-VO)法。将大鼠置于麻醉盒中,放入装有乙醚纱布的小烧杯作诱导麻醉,待其四肢瘫软后取出,用沾有乙醚的纱布放大鼠鼻孔附近维持麻醉。将大鼠俯卧位固定于手术台上,鼠头与躯干屈曲30°,颈后正中切口1~2cm,暴露第一颈椎两侧横突孔,将去掉针尖的6 1/2号针头在酒精灯上加热,烧灼从横突孔中穿行的椎动脉,使其断开。逢合切口。再将大鼠仰卧位固定在手术台上,颈正中切口1~2cm,颈动脉三角处牵开胸锁乳突肌,分离、暴露两侧颈总动脉,用无损伤动脉夹夹闭两侧颈总动脉,20min后解除动脉夹,开始再灌注。 模型成功标志:去除乙醚麻醉后动物仍意识丧失,翻正反射消失,口唇、双眼球苍白,角膜反射消失,瞳孔散大,金属镊刺激口唇无咬啮活动。解除夹闭后1~2min以上症状均消失。出现抽搐及手术过程中大出血的大鼠淘汰。 二、血清NSE浓度测定 大鼠在再灌注后24h,乙醚麻醉下取心脏血2ml,静置,离心,取血清50μl,严格按照大鼠NSE ELISA试剂盒使用说明操作,经酶标仪在450nm处读出OD值后,在绘制的标准曲线上算出对应的血清NSE浓度(μg/L)。 三、组织学观察 将40g/L多聚甲醛(pH 7.4)固定的鼠脑自前囟-2.3mm~-6.8mm范围内取组织做冠状切片,脱水,包埋,HE染色,光镜下观察细胞形态学改变。 四、数据分析 各组数据均以(?)±s表示,用Sigma Stat软件进行随机效应模型的析因方差分析和Dunnett检验。 实验结果 1、不同给药时机对大鼠血清NSE浓度的影响: 0mg/kg剂量各组之间,大鼠血清NSE浓度变化没有显著性差异(p>0.05)。3mg/kg和6mg/kg剂量各组中,再灌注即时给药组和缺血前30分钟+再灌注即时给药组分别与缺血前30分钟给药组相比,大鼠血清NSE浓度显著降低(p<0.05);而再灌注即时给药组和缺血前30分钟+再灌注即时给药组之间没有显著性差异(p>0.05)。12mg/kg剂量各组之间,大鼠血清NSE浓度变化没有显著性差异(p>0.05)。 2、不同给药剂量对大鼠血清NSE浓度的影响: 0mg/kg剂量各组和对照组相比,大鼠血清NSE浓度变化没有显著性差异(p>0.05)。3mg/kg、6mg/kg和12mg/kg剂量各组与0mg/kg剂量各组和对照组相比,大鼠血清NSE浓度显著降低(p<0.05)。缺血前30分钟给药各组中,12mg/kg剂量组与3mg/kg和6mg/kg剂量组相比,大鼠血清NSE浓度显著降低(p<0.05)。再灌注即时给药各组和缺血前30分钟+再灌注即时给药各组中,不同给药剂量组间大鼠血清NSE浓度变化没有显著性差异(p>0.05)。 3、大鼠海马CA1区组织学改变: 光镜下可见对照组和0mg/kg剂量各组大鼠海马CA1区神经细胞胞体肿胀明显,染色质呈细颗粒状或弥散性深染,核仁与染色质分辨不清,细胞膜溶解,细胞质外漏,细胞残缺不全、数目减少、排列疏松,呈神经细胞损伤性改变。3mg/kg、6mg/kg和12mg/kg剂量各组大鼠海马CA1区也可见神经细胞损伤性改变,但程度较对照组和0mg/kg组轻。 讨论 本实验通过复制大鼠全脑缺血/再灌注损伤模型,并且在缺血前30分钟、再灌注即时和缺血前30分钟+再灌注即时分别给予0mg/kg、3mg/kg、6mg/kg和12mg/kg的丹参酮ⅡA磺酸钠注射液,观察给药时机和给药剂量对脑缺血/再灌注损伤的影响。结果显示,在上述设定的给药时机给予不同剂量的丹参酮ⅡA,均能降低大鼠脑缺血/再灌注损伤后血清NSE浓度,且光镜下可见海马CA1区神经细胞损伤减轻,证明丹参酮ⅡA对脑缺血/再灌注损伤具有保护作用。而再灌注即时给药和缺血前30分钟+再灌注即时给药的效果更为明显。由于再灌注即时给药和缺血前30分钟+再灌注即时给药的作用效果无显著性差异,因此,在应用丹参酮ⅡA保护脑组织,减少缺血/再灌注损伤时,不必联合缺血前30分钟给药,在再灌注即时给药即可。当给予不同剂量的丹参酮ⅡA时,我们发现,在再灌注即时给药或缺血前30分钟+再灌注即时给药时,低剂量与高剂量的作用效果相近。因此为减少药物副作用,在应用丹参酮ⅡA保护脑组织,减少缺血/再灌注损伤时,给予低剂量药物即可达到保护作用。 结论 1、丹参酮ⅡA对脑缺血/再灌注损伤具有保护作用。 2、在脑缺血/再灌注即时给予丹参酮ⅡA,对脑缺血/再灌注损伤的保护作用优于脑缺血之前给药。 3、在脑缺血/再灌注即时给予丹参酮ⅡA时,低剂量与高剂量的作用效果相近。


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