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肝移植受者外周血调节性T细胞变化及其临床意义

钟嘉明  
【摘要】: 目的 器官移植的最终目标是实现移植物耐受即在停用免疫抑制剂下维持移植物功能,似同时保留受者对外源性抗原的免疫应答。虽然目前临床上还很难实现,但已有部分器官移植受者在停用免疫抑制剂后并未出现移植物排斥反应,特别是在肝移植受者中较常见。研究表明CD4~+CD25~+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)介导的免疫调节在诱导移植物免疫耐受中起重要作用。本研究检测同种原位肝移植术后肝功能稳定受者外周血CD4~+CD25~+FOXP3~+Tregs水平变化,探讨不同血药浓度他克莫司(Tacrolimus,FK506)维持免疫治疗对Tregs水平的影响,为临床肝移植受者移植免疫监测和合理应用免疫抑制剂提供依据。 方法 选择37例行原位肝移植受者作为研究对象,所有受者接受FK506维持免疫治疗且肝功能长期稳定(>1年),根据采血时的FK506血药浓度分为低浓度组(FK506<6.0 ng/ml)30例和高浓度组(FK506≥6.0 ng/mL)7例;30例同龄健康人群作为正常对照组。清晨空腹采静脉血2ml,肝素抗凝,Ficoll淋巴细胞分离液进行密度梯度离心,分离出外周血单个核细胞(PBMC),荧光免疫抗体标记后流式细胞术检测PBMC中CD4、CD25和FOXP3的表达水平,应用Cell quest软件分析流式检测结果。各群细胞占淋巴细胞比率从流式分析结果图中直接读取,细胞绝对数通过采血当天的血常规结果进行计算。比较各组之间CD4~+CD25~+和CD4~+CD25~+FOXP3~+Tregs绝对数和比率差异,同时对肝移植受者Tregs水平与FK506血药浓度进行Spearman秩相关分析。 结果 低浓度组受肯外周血CD4~+CD25~+和CD4~+CD25~+FOXP3~+Tregs绝对数和占淋巴细胞比率较对照组减少但无明显差异(P>0.05),高浓度组则显著低于对照组(P<0.01)和低浓度组(P<0.05)。两组肝移植受者CD4~+CD25~+和CD4~+CD25~+FOXP3~+Treg细胞与CD4~+T细胞的比率均与对照组无明显差异(P>0.05)。肝移植受者CD4~+CD25~+和CD4~+FOXP3~+占淋巴细胞比率与FK506血药浓度呈显著负相关([γ=-0.479,P=0.003]和[γ=-0.648,P<0.001])。在原发病为肝癌与非肝癌受者间Tregs水平无明显差异(P>0.05),FK506单用或FK506+霉酚酸酯(MMF)二联免疫抑制治疗方案间Tregs亦无明显差异(P>0.05)。 结论 1、肝移植受者在FK506维持免疫治疗下肝功能长期稳定时,外周血CD4~+CD25~+和CD4~+CD25~+FOXP3~+Treg细胞绝对数量和占淋巴细胞比率较正常正常人群降低。 2、肝移植受者肝功能长期稳定时,外周血CD4~+CD25~+和CD4~+CD25~+FOXP3~+Treg水平与FK506血药浓度有关,高血药浓度受者Treg细胞数量和占淋巴细胞比率均显著降低,低血药浓度受者Treg水平虽有降低但无统计学差异。Treg细胞水平随血药浓度升高逐渐降低,两者呈显著负相关。 3、肝移植受者肝功能长期稳定时,外周血CD4~+CD25~+/CD4~+和CD4~+CD25~+FOXP3~+/CD4~+比率与正常人群无明显变化。


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