ABCE1蛋白在肺癌、癌旁组织及转移淋巴结中的Western blot和免疫组化法检测

【摘要】： 目的 原发性支气管肺癌(primary bronchoginic carcinoma,或称肺癌),是指起源于支气管粘膜上皮或腺体的恶性肿瘤。其发病率和死亡率一直居高不下,自上世纪80年代起,已成为全球范围内发病率最高的恶性肿瘤。肺癌早期诊断困难,65%的患者在确诊时已属晚期,转移成为其致死和治疗失败的主要原因。淋巴结转移是肺癌扩散的主要途径,也是影响手术根治性及预后的主要因素。如果能找出淋巴转移的相关基因,对认清肿瘤的进展和转移以及治疗有很大的帮助。ABCE1基因(ATP-binding cassette transporter E1)属ATP结合盒转运子基因亚家族成员之一,其编码的ABCE1蛋白的结构中含有一个N端的Fe-S区和两个核酸结合区,文献报道ABCE1是一种高度保守的蛋白,在所有的真核及原核生物中都有一到两种转录本普遍表达。ABCE1蛋白最初被发现能够特异性结合并抑制哺乳动物细胞内一种被干扰素诱导的核糖核酸酶L,因此又名为核糖核酸酶L抑制因子,之后的研究表明它在HIV、SIV病毒限制性多肽的聚集方面也发挥着必须的作用。在酵母中的研究显示,ABCE1表达的蛋白参与了细胞分裂及蛋白质翻译起始复合物的形成,同样证实,人类ABCE1通过与翻译起始因子eIF2α和eIF5的结合从而在mRNA翻译的起始过程中发挥着必不可少的作用。众所周知,肿瘤细胞的蛋白翻译过程异常亢进,许多参与翻译过程的蛋白因子如核糖体蛋白S6激酶,mTOR和4E-BP1都已成为肿瘤干预治疗的分子靶点。体外实验表明,抑制ABCE1达能有效抑制人类肿瘤细胞的生长。因此,我们推测在肿瘤细胞中通过抑制ABCE1表达可有效遏制肿瘤的进展。本实验就是通过免疫印迹(western blot)技术及免疫组化链霉素抗生物素蛋白-氧化物(streptavidin peroxidase, SP)法检测ABCE1蛋白在肺癌原发灶、转移淋巴结与癌旁肺组织之间的表达差异,从而评价其对肺癌进展和转移的影响,评价其可能的临床意义。 实验方法 本实验采集临床手术切除的不同肺叶或肺段的人肺癌组织标本,及其转移淋巴结和距离肿瘤边缘≥5厘米的癌旁肺组织配对标本,用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物(streptavidin peroxidase, SP)法对ABCE1蛋白进行定位,用免疫印迹法(Western Blot)法检测ABCE1蛋白的表达量差异。 结果 1.ABCE1蛋白在肺癌组织的相对表达量为1.032±0.510,在癌旁组织的相对表达量为0.631±0.619,二者比较有显著性差异。P0.05 2.ABCE1蛋白在转移淋巴结组织的相对表达量1.269±0.755,在癌旁组织的相对表达量为0.631±0.619,二者比较有显著性差异。P0.05 3.ABCE1蛋白在转移淋巴结组织的相对表达量1.269±0.755,在肺癌组织的相对表达量为1.032±0.510,二者比较有显著性差异。P0.05 4.ABCE1蛋白在肺腺癌组织的相对表达量为1.25±0.79,在肺鳞癌组织的相对表达量为0.78±0.30,二者比较有显著性差异。P0.05 5.在高、中、低分化互相比较时,各组比较未见统计学差异。 6.免疫组化结果示：ABCE1的蛋白表达主要定位于细胞浆。 结论 1.ABCE1蛋白在肺癌组织、转移淋巴结组织的表达量明显上调,且在转移淋巴结中的表达量明显增高,但是与组织的分化程度无关。 3.ABCE1蛋白的表达量与肺癌的发生,转移正相关,ABCE1可能参与了肺癌的发生及进展过程。 4.ABCE1的阳性表达物质定位于细胞浆。