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朱砂对大鼠脑组织抗氧化指标、氨基酸类神经递质及必需金属元素含量的影响

丁敬华  
【摘要】: 前言 朱砂(Cinnabar)为硫化物类矿物辰砂族辰砂,味甘,性寒,有毒,入心经,具有清心镇惊,安神解毒之功效。朱砂作为药用在我国已有上千年的历史,应用十分广泛。现行四大国家标准(《中华人民共和国药典》、《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第1-20册、《国家中成药标准汇编·中成药地方标准上升国家标准部分》和《国家药品标准·新药转正标准》第1-44册)中收载的含朱砂的成方制剂有362种,占其收载成方制剂总数的5.2%,其中有许多为人们喜好的常用和著名品种(如安宫牛黄丸、朱砂安神丸、小儿金丹片、小儿百寿丸等)。近年来,由于受传统用药习惯(认为中药无毒副作用和不良反应,可长期连续服用)的影响,临床上因未科学(长期、超量和不规范)合理使用单味朱砂或其复方制剂引起不良反应或中毒事件报道日益增多,朱砂的主要成分为硫化汞(HgS),另外还含有少量可溶性汞和游离汞。硫化汞难溶于水,在胃肠道中不易被分解、吸收而从粪便中排出,无明显的毒副作用,而可溶性和游离汞易被机体吸收,对人体具有极大的毒性。朱砂中可溶性汞含量多少直接决定朱砂毒性大小。大量内服朱砂可能会转化成甲基汞而增加中毒机会。近年来,汞对中枢神经系统的毒性作用引起了人们的广泛关注。临床研究、流行病学调查和动物实验均显示长期接触汞可导致精神、行为障碍,能引起智能下降、共济失调、语言障碍、听力及视力障碍,肢体感觉障碍,出现肌肉长期、剧烈、自发性刺痛或烧灼痛。因此,阐明朱砂对神经系统的毒性机制对于指导临床合理用药,保护健康具有重要的理论和现实意义。 材料与方法 中国医科大学实验动物部提供Wistar大鼠32只,体重150±10g,雌雄各半,正式实验前适应性饲养一周,按体重随机分成4组,每组8只,第1组为空白对照组,第2、3、4组依次为朱砂低(1g/kg)、中(2g/kg)、高(4g/kg)剂量组。空白对照组灌胃同体积0.3%CMC-Na溶液,其余三组灌胃不同浓度朱砂混悬液。每天1次,每周7天,共2周。灌胃容量全部为10ml/kg。最后一次灌胃2h后,10%水合氯醛(0.4ml/100g)腹腔注射麻醉大鼠,腹主动脉取血,并加肝素抗凝。然后迅速开颅取完整的大脑,并根据检测酶学指标的不同,制备成相应的匀浆液待用(冰浴下进行)。 第一部分体外实验:采用柱前衍生化-高效液相色谱紫外检测法测定朱砂在人工胃液中可溶性汞含量。 第二部分体内实验:采用冷原子吸收法测定大鼠血液、脑组织中汞含量,采用试剂盒法测定抗氧化指标MDA含量、GSH含量和SOD活性。蛋白含量测定:考马斯亮蓝法测定蛋白含量。采用原子吸收分光光度法测定大鼠脑组织中Ca、Mg、Zn、Cu的含量。采用高效液相色谱荧光检测法测定大鼠脑组织中氨基酸类神经递质的含量。 结果 体外实验表明,朱砂中存在可溶性的汞,其含量为0.190mg/g(n=5,RSD=2.7%)。 体内实验表明,经过朱砂灌胃染毒,与对照组(0.04±0.01μg/g)相比较,实验组大鼠的脑组织中汞含量明显升高(低剂量组0.23±0.07μg/g、中剂量组0.24±0.09μg/g、高剂量组0.26±0.03μg/g)。染毒后大鼠脑组织SOD、GSH含量均有明显升高,SOD由对照组的116.52±11.96U/mg Pro分别升高至低剂量组171.50±28.81U/mg Pro、中剂量组178.05±29.78U/mg Pro、高剂量组136.41±24.62U/mgPro。GSH含量由对照组的8.39±0.70μmol/g Pro分别升高至低剂量组11.31±2.22μmol/g Pro、中剂量组12.07±1.85μmol/g Pro、高剂量组9.91±1.09μmol/g Pro。且升高的差异有统计学意义。MDA含量由对照组的2.83±0.59nmol/g Pro分别升高至低剂量组2.85±0.43nmol/g Pro、中剂量组3.75±0.58nmol/g Pro、高剂量组6.47±0.63nmol/g Pro。 朱砂对大鼠脑组织中Ca、Mg、Zn、Cu元素含量也有一定的影响:与对照组比较,各实验组Ca、Cu含量均有升高趋势,且Ca的升高具有统计学差异。Mg含量有降低趋势,但差异无统计学意义。Zn元素有降低趋势,与对照组比较差异有统计学意义。 大鼠脑组织中五种氨基酸类神经递质天冬氨酸(ASP)、甘氨酸(GLY)、牛磺酸(TAU)、γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(GLU)含量也有较明显的下降趋势。 结论 1、朱砂中含有可溶性汞,Hg可透过血脑屏障进入脑中; 2、SOD, GSH、MDA的活力/含量变化提示经给药后能引起大鼠中枢神经系统的氧化应激反应,可能对中枢神经系统造成氧化损伤作用; 3、朱砂能引起大鼠脑组织中Ca、Cu、Mg、Zn元素含量的变化,Ca和Zn变化较明显; 4、引起大鼠脑组织氨基酸含量变化提示朱砂对氨基酸类神经递质的代谢转运产生影响。


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