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蛋氨酸脑啡肽单独或联合IL-2、IFN-γ对小鼠CD4~+T细胞作用的研究

夏燕杰  
【摘要】: 前言 蛋氨酸脑啡肽(Methionine Enkephalin, MENK),是由肾上腺产生的前激素和前脑啡肽衍生而来,由5个氨基酸残基组成的内源性阿片肽。近年来研究表明,适宜浓度的MENK通过作用于免疫细胞上阿片受体(Opioid growth factor receptor,OGFr),对免疫系统活性具有显著的调节作用,有人称它为新型细胞因子或阿片生长因子(Opioid growth factor,OGF)。经典阿片受体可分为μ(mu)、8(delta)、κ(kappa)等几种亚型,MENK通过与这些受体的相互作用而起到免疫调节作用。在过去的研究中,证明了MENK单独或与其它细胞因子(IFN-y或IL-2)联合应用能增强机体免疫细胞的功能,但是对具体作用机制尚不清楚,特别是对CD4+T细胞的作用机理,经MENK刺激后CD4+T细胞数量和活性的变化,细胞因子产生情况,至今未见报道。 本实验通过体内外MENK单独或联合IL-2、IFN-γ对C57BL/6小鼠CD4+T细胞数量,CD4+T细胞阿片受体mRNA表达量以及细胞因子产生量的变化,以其来阐明MENK对CD4+T细胞的具体免疫效应,为MENK的潜在临床应用提供理论和实验依据。 实验材料和方法 一、实验动物 C57BL/6小鼠18-20g,SPF级,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。 二、实验方法 1、原代细胞培养、处理及磁珠分离纯化CD4+T细胞; 2、流式细胞术检测不同处理组CD4+T细胞数量; 3、半定量RT-PCR检测比较阿片受体μ、δ、κmRNA表达水平; 4、ELISA法检测CD4+T细胞产生IL-2、IFN-γ的水平。 结果 一、流式细胞术 体内外各实验组小鼠脾CD4+T细胞数量与对照组比,均明显增加(P0.05),体内MENK+IL-2组和MENK+IFN-y组与MENK组相比CD4+T细胞数量显著增加(P0.05),体外MENK+IL-2组和MENK+IFN-y组与MENK组相比CD4+T细胞数量无明显增加(P0.05)。 二、半定量RT-PCR 体内外实验组小鼠脾CD4+T细胞均检测到μ、δ、κ三种阿片受体mRNA的表达,且各处理组与对照组相比,μ、δ受体mRNA的表达量均明显增加(P0.05),K受体mRNA的表达量无明显增加(P0.05)。体内MENK+IL-2组和MENK+IFN-y组与MENK组相比小鼠脾CD4+T细胞μ、δ受体mRNA的表达量均显著增加(P0.05);体外MENK+IL-2组和MENK+IFN-y组与MENK组相比μ、δ受体mRNA的表达量无明显增加(P0.05)。 三、ELISA CD4+T细胞上清液中IL-2、IFN-γ的产生水平:体内外各实验组与对照组比,均明显增加(P0.05),体内MENK+IL-2组和MENK+IFN-y组与MENK组相比IL-2、IFN-y量显著增加(P0.05),体外MENK+IL-2组和MENK+IFN-y组与MENK组相比IL-2、IFN-y量无明显增加(P0.05)。 结论 MENK单独或联合IL-2、IFN-y,在体内能显著增加小鼠CD4+T细胞数量,CD4+T细胞μ、δ阿片受体mRNA水平表达及细胞因子IL-2、IFN-y含量;体外MENK单独应用可以显著增加小鼠CD4+T细胞数量,CD4+T细胞μ、δ阿片受体mRNA水平表达及细胞因子IL-2、IFN-γ含量;但体外MENK联合IL-2或IFN-y与MENK单独作用时相比无明显差异。


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