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大鼠牙囊细胞分离培养及生物学特性的体外研究

宫坤  
【摘要】:目的 体外培养用差速贴壁法和有限稀释法纯化的大鼠牙囊细胞,并观察其生物学特性,为将之用作口腔组织工程的种子细胞奠定基础。 方法 体式显微镜下准确分离7d龄SD大鼠第一磨牙牙囊组织,用酶消化法、有限稀释法和差速贴壁法进行培养和纯化细胞,取第三代细胞分别进行以下实验:1、克隆形成实验;2、流式细胞仪鉴定DFCs表面抗原分子表达,并与骨髓间充质干细胞表面相关因子表达情况进行对比;3、骨向诱导、成脂诱导、成神经诱导及相关免疫组织化学检测实验;4、培养同批动物来源的骨髓间充质干细胞和牙囊细胞,应用实时定量PCR检测两者成骨、成脂、成神经诱导前后相关基因的改变。 结果 1、差速贴壁法和有限稀释法纯化培养的大鼠牙囊细胞多数呈长梭形,部分呈三角形,细胞形态呈现异质性,克隆形成能力增强(5.25±0.64)%。2、流式细胞仪检测结果显示所获得的牙囊干细胞表面分子CD29、CD90、CD146阳性率分别为95.6%、98.6%、31.1%,而CD31、CD45的阳性率仅为1.6%、4.2%。3、成骨诱导后,茜素红染色呈阳性,ALP染色显示ALP表达增强明显;成脂诱导后细胞胞浆内可见明显脂滴,油红O染色呈阳性;成神经细胞诱导后细胞形态发生明显改变,神经微管蛋白染色呈阳性。4、DFCs与骨髓间充质干细胞(BMMSCs)相比,相同条件诱导后COL-1、DMP、OCN、BSP基因表达明显增高,而COL-3、ON表达较低。 结论 体外培养的大鼠牙囊细胞具有较强的克隆形成能力和多向分化潜能,结合其细胞异质性以及细胞表面特异性抗原分子表达结果,提示大鼠牙囊细胞具有牙周乃至口腔组织工程理想种子细胞的细胞学基础,可作为口腔组织工程理想的种子细胞。


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