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山丹花鳞茎醇提物对小鼠脂肪酶的抑制作用研究

萨日那  
【摘要】:山丹花是百合科百合属的多年生植物,中国多处地方都可生长。本论文的预实验结果表明,山丹花具有抑制脂肪酶的作用,故本论文通过比较花、叶、茎、鳞茎四个部位的脂肪酶抑制作用大小,得出山丹花鳞茎对脂肪酶抑制率最高,后续实验以山丹花鳞茎为研究对象,提取山丹花鳞茎醇提物(Lilium pumilum album bulb alcoholic extract:LPABAE)对脂肪酶的抑制率为指标,运用单因素法和响应面优化其醇提物的提取工艺;并通过米氏方程-Lineweaver-Burk双倒数法和Dixon作图法测定其以其抑制脂肪酶的半抑制率IC50、Km和Vmax值、判定酶抑制类型,进一步研究不同影响因子对LPABAE抑制脂肪酶的作用影响,最后通过高血脂小鼠模型的建立、生化指标的检测和HE染色法研究LPABAE在小鼠体内的降脂作用及其对小鼠各器官组织的形态学影响。具体研究内容和结果如下:(1)以脂肪酶抑制率为主要指标,研究了山丹花的花、茎、叶、鳞茎等四部位对脂肪酶的抑制情况;通过单因素及响应面法优化了LPABAE最佳提取工艺;并对LPABAE中的主要有效成分含量进行测定。结果表明:鳞茎部位抑制脂肪酶的作用最强;LPABAE的最佳提取工艺为料液比(g/mL)为1.3:5,超声功率为150 W,超声温度为35℃,超声时间为57 min,乙醇浓度为95%,最高抑制率为48.35%±1.1205%;提取率为15.38%,其醇提物的主要有效成分是多酚为79.18%、多糖为5.31%和黄酮为0.46%。(2)运用米氏方程-Lineweaver-Burk双倒数法和Dixon作图法,测定了LPABAE对抑制脂肪酶的半抑制率IC50、Km和Vmax值、判定酶抑制的具体类型,并进一步研究不同影响因子对LPABAE抑制脂肪酶的作用影响。结果表明:LPABAE浓度对脂肪酶的抑制效果成正效应关系,其半抑制率IC50为0.291,酶抑制的具体类型是可逆竞争性抑制,Ki=0.08509mg/mL,对脂肪酶抑制的方程式为v=2.84[s]/57132.56+[s];五种有机酸(酒石酸、水杨酸、柠檬酸、草酸、冰醋酸)、四种无机物(氯化钾、硫酸亚铁、硫酸铝、H2O2)中五种有机酸、氯化钾和硫酸铝能够显著增强LPABAE抑制脂肪酶的作用(P0.05),不能改变可逆性抑制类型,其中硫酸铝的抑制率最高,体外消化液对LPABAE抑制脂肪酶作用无影响,硫酸亚铁和H2O2能够显著减弱山丹花鳞茎醇抑制脂肪酶作用,将可逆竞争性抑制类型改变为非竞争性抑制类型,其中H2O2抑制率最低。(3)以小鼠饮食状态、毛色、精神状况、活动能力以及组织HE染色切片为指标,研究了 LPABAE安全性评价。结果表明:期间小鼠饮食正常、毛色好有光泽、无过度兴奋症状、活动能力正常,心脾肝肾组织HE染色切片来看,组织无明显萎缩以及功能性能无影响,因此尚未发现LPABAE具有毒性。(4)以小鼠体重下降率、Lee's指数、血脂和血清酶水平、组织重量、组织系数、组织切片、动脉粥样硬化指数(AI)为指标,分别研究了 LPABAE对高血脂模型小鼠肥胖程度、脂肪、肝脏、心、脾、肾、动脉粥样硬化的影响。其结果表明:体重下降率高剂量组降低幅度最大(P0.05);LPABAE低剂量、中剂量和高剂量可有效降低高脂模型小鼠肥胖程度,高剂量组较好;LPABAE对脂肪的细胞的影响从脂肪重量和脂肪系数以及肾旁脂肪细胞面积来看高剂量组有极显著的影响(P0.05),从血脂水平来看中剂量组和高剂量组效果显著(P0.05);从肝脏重量和肝脏指数来看中剂量和高剂量组的LPABAE有一定保护肝脏的作用,从肝脏相关血清酶水平来看高剂量组具有显著保护肝脏降低炎症的作用(P0.05);高浓度的LPABAE可以有效的降低动脉粥样硬化导致心血管疾病的风险,其次是中浓度的LPABAE;高脂模型小鼠对心脏和脾脏和肾脏无较大损害,三种剂量的LPABAE同样无影响。


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