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丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

白艳娟  
【摘要】:目的:采用丁苯酞药物预处理的方法,运用Sprague-Dawley(SD)大鼠局灶性脑缺血再灌注(MCAO)模型,通过观察神经功能缺损程度,测定脑梗死体积,检测脑组织内半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2表达的变化,研究丁苯酞预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。 方法:健康成年SD雄性大鼠48只,体重200-250g,清洁级,室温环境饲养,自由进食水。按随机原则分为假手术组、缺血再灌注组、丁苯酞预处理后脑缺血再灌注组(丁苯酞预处理组),每组各16只。丁苯酞预处理组于术前5天开始予丁苯酞溶剂(以丁苯酞胶囊溶于生理盐水配成10mg/ml混悬液,用前充分摇匀)以200 mg/kg/d的剂量进行灌胃,1次/天;假手术组和缺血再灌注组亦均于术前5天开始以等体积生理盐水(0.9%氯化钠溶液)灌胃,1次/天。 参照Zea-Longa线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注(MCAO)模型,插入栓线18mm,缺血2h后拔出栓线,实施再灌注24h(假手术组仅暴露右侧颈总动脉,余不做其他处置)。 参照Zea-Longa5分制评分标准进行神经功能缺损评分,各组达再灌注时间点后,断头取脑,分别行(1)2%氯化-2,3,5-三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl tetrazalium chloride, TTC)染色,并用photoshop图像分析观察脑梗死体积;(2)苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin, HE)染色观察SD大鼠脑组织的病理形态;(3)免疫组织化学检测方法观察Caspase-3、Bcl-2表达的变化。 结果: 1、神经功能缺损评分:假手术组无神经功能缺损,评分均为0分;与假手术组相比,缺血再灌注组及丁苯酞预处理组均有明显的神经功能缺损症状,有显著性差异(P0.01);与缺血再灌注组相比,丁苯酞预处理组神经功能缺损程度减轻,差异有统计学意义(P0.05)。 2、脑梗死体积测定:假手术组为正常脑组织,无梗死灶,呈红色;与假手术组相比,缺血再灌注组及丁苯酞预处理组均有明显的白色梗死灶,有显著性差异(P0.01);与缺血再灌注组相比,丁苯酞预处理组梗死灶体积减小,差异有统计学意义(P0.05)。 3、HE染色:假手术组为正常脑组织,其组织排列层次分明,视野可见形态结构正常的神经细胞;缺血再灌注组于缺血部位可见排列紊乱的脑组织,神经细胞皱缩变性,细胞组织间水肿,并可见空泡样改变;与缺血再灌注组相比较,丁苯酞预处理组缺血部位神经细胞变性、坏死的数量有所减少,空泡样改变及组织间水肿程度有所减轻。 4、免疫组织化学检测: (1)Caspase-3的表达:假手术组Caspase-3阳性细胞仅见少量表达,与假手术组相比,缺血再灌注组及丁苯酞预处理组均可见较多的Caspase-3阳性细胞表达,有显著性差异(P0.01);与缺血再灌注组相比,丁苯酞预处理组Caspase-3阳性细胞数量减少,差异有统计学意义(P0.05)。 (2)Bcl-2的表达:假手术组Bcl-2阳性细胞仅见少量表达;与假手术组相比,缺血再灌注组及丁苯酞预处理组均可见较多的Bcl-2阳性细胞表达,有显著性差异(P0.01);与缺血再灌注组相比,丁苯酞预处理组Bcl-2阳性细胞数量增加,差异有统计学意义(P0.05)。 结论: 1、Caspase-3和Bcl-2的表达均参与了脑缺血再灌注损伤的过程,其中,Caspase-3促进神经细胞凋亡的发生,而Bcl-2则起到了抑制神经元凋亡的作用。 2、丁苯酞药物预处理的方法可以减轻SD大鼠脑缺血再灌注所致的损伤程度,减轻神经功能缺损症状,缩小脑梗死灶的体积,减少神经细胞变性、坏死的数量,并可使促凋亡细胞Caspase-3表达数量减少,抗凋亡细胞Bcl-2表达数量增加。 3、丁苯酞可减轻缺血性脑血管病的发生程度,具有一定的神经保护作用。


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