收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

GMF β-MKK3/6信号通路在β-榄香烯抗脑胶质瘤细胞增殖中的作用

朱廷准  
【摘要】:榄香烯(Elemene)是我国自主开发的、从中药莪术(温郁金)中提取的国家二类非细胞毒性抗肿瘤药,以β-、γ-和δ-榄香烯的油状混合物形式存在。作为其主要的活性成分,β-榄香烯在体内和体外可以明显抑制胶质瘤细胞的增殖。但由于抗胶质瘤作用的分子机制尚不明确,限制了其在临床上的应用。丝裂原活化蛋白激酶激酶-3(Mitogen-activated protein kinase kinase 3,MKK3)和-6(Mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)是丝裂原活化蛋白激酶p38(Mitogen-activated protein kinase p38,p38 MAPK)信号通路的两个上游激活因子。MKK3/6在多种肿瘤组织中被发现表达异常,同时MKK3/6也介导了许多药物的抗肿瘤作用。神经胶质成熟因子β(Glia Maturation Factor Beta,GMFβ)是一种17 kDa的小分子脑蛋白,在神经胶质细胞和神经元的生长发育、增殖、分化和凋亡过程中起着关键性的调节作用,这种作用常常通过调节MAPK信号通路的活性得以实现。我们前期的研究结果表明,p38 MAPK的激活以及细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Extracellular Signal-regulated Protein Kinase1/2,ERK1/2)的失活在β-榄香烯抗胶质瘤细胞增殖中是不可或缺的。然而,β-榄香烯通过什么途径引起了胶质瘤细胞中上述信号通路的活性改变仍不得而知。 目的: 1、评价β-榄香烯对人U87及大鼠C6胶质瘤细胞的抗增殖及细胞周期阻滞作用。 2、探讨MKK3和MKK6在β-榄香烯抗胶质瘤细胞增殖中的作用。 3、明确GMFβ在β-榄香烯抗胶质瘤细胞增殖中的作用,及其与MKK3/6的关系。 4、检测β-榄香烯对顺铂抗胶质瘤是否具有化疗增敏作用。 方法: 1、第一部分实验:分别以不同浓度(0、20、40、60和80μg/ml)的β-榄香烯作用于U87及C6细胞不同的时间(0、12、24、36和48小时),噻唑蓝(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期,并计算各组细胞周期中G0/G1期的百分比。 2、第二部分实验:用β-榄香烯处理胶质瘤细胞后,提取各组细胞的总蛋白,用Western blot检测MKK3和MKK6的总蛋白及磷酸化蛋白含量,RT-PCR检测MKK3和MKK6的mRNA表达水平,应用Gel-Pro Analyzer 4.0软件半定量分析条带灰度,对结果进行统计学分析。用脂质体法将MKK3和MKK6的显性负突变(Dominant Negative,DN)质粒DN-MKK3和DN-MKK6转染进入胶质瘤细胞中,以抑制MKK3和MKK6的活性,免疫荧光法检测转染效率,同时行MTT法检测β-榄香烯对胶质瘤细胞活性的抑制能力。免疫组织化学方法检测人正常脑组织及胶质瘤组织中总的及磷酸化的MKK3/6的表达水平,探索MKK3/6与胶质瘤发病的关系。 3、第三部分实验:免疫沉淀联合Western blot法检测经β-榄香烯处理的胶质瘤细胞中总的及磷酸化的GMFβ蛋白的表达水平。采用RNA干扰技术,使胶质瘤细胞中GMFβ的表达沉默,然后以MTT法检测β-榄香烯的抗胶质瘤增殖的能力。同时,用Western blot法检测β-榄香烯对MKK3和MKK6的激活作用是否因GMFβ沉默而受到影响。4、第四部分实验:用化疗药顺铂和β-榄香烯单独或联合作用于胶质瘤细胞,细胞计数法检测细胞数量,计算细胞生长抑制率,进而确定β-榄香烯对胶质瘤细胞的化疗增敏作用。 结果: 1、第一部分实验:β-榄香烯显著抑制了人U87及大鼠C6胶质瘤细胞系的增殖活性,并增加了细胞周期中G0/G1期细胞的比例。β-榄香烯对胶质瘤细胞的增殖抑制作用具有时间依赖性和浓度依赖性。 2、第二部分实验:β-榄香烯使胶质瘤细胞中MKK3和MKK6的磷酸化水平上调。相反,通过转染显性负突变质粒抑制MKK3和MKK6的活性则可使β-榄香烯的抗胶质瘤增殖作用明显减弱。同时,在β-榄香烯的作用下,MKK3和MKK6其中一种的活性被抑制时,另一种的活性会代偿性地增强,MKK3和MKK6呈现出相互代偿性的激活。人胶质瘤组织中MKK3和MKK6的活性较正常脑组织显著增强。 3、第三部分实验:β-榄香烯可使GMFβ的磷酸化水平增加。相反,通过RNA干扰技术抑制GMFβ的表达,可以使MKK3和MKK6的磷酸化水平下调,并降低β-榄香烯的抗胶质瘤细胞增殖的效果。 4、第四部分实验:β-榄香烯与顺铂联合应用时,胶质瘤细胞的生长抑制率显著高于单独用药组,β-榄香烯对胶质瘤具有化疗增敏作用。 结论: 1、β-榄香烯可以通过将U87和C6细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,进而有效地抑制胶质瘤细胞的增殖。 2、依赖于GMFβ磷酸化的MKK3和MKK6的相互代偿性的激活介导了β-榄香烯的抗胶质瘤增殖作用。同时,MKK3/6在人胶质瘤的发病中扮演了重要角色。 3、在顺铂的抗胶质瘤增殖过程中,β-榄香烯表现出较强的化疗增敏作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 赵小冬,刘剑凯,洪敏;芬太尼对C6胶质瘤细胞黄嘌呤氧化还原酶基因表达的影响[J];中国药理学通报;2003年06期
2 李方成,余进,陶宗玉,李军亮,林吉惠;胶质瘤细胞的生长速度与葡萄糖摄取的关系[J];中华实验外科杂志;2003年10期
3 黄强;胶质瘤起源细胞探讨[J];中国微侵袭神经外科杂志;2003年08期
4 王飞,李世亭;胶质瘤的起源细胞与神经干细胞的关系[J];中国肿瘤;2004年04期
5 高进喜,王守森,王如密;胶质瘤化疗进展[J];中国微侵袭神经外科杂志;2004年05期
6 李蕴潜,李毅平,李才;基质金属蛋白酶2及其抑制物在人胶质瘤中的表达[J];吉林大学学报(医学版);2004年06期
7 岳武;宋大勇;孔令秀;赵钊;孟祥喜;张旭;王殿洪;王策;;体外超声激活血卟啉单甲醚抗C6胶质瘤细胞的研究[J];中国激光医学杂志;2006年05期
8 高树梓;高宜录;林社裕;刘道坤;;C6胶质瘤细胞培养上清诱导神经干细胞迁移的初步研究[J];中国神经肿瘤杂志;2006年04期
9 江涛;王忠诚;;构建胶质瘤综合治疗体系[J];河北医药;2007年01期
10 刁宏宇;张明杰;高连波;喻博;李少一;王成林;;基质金属蛋白酶9在胶质瘤中的表达[J];中国医科大学学报;2007年01期
11 李振飞;张梅奎;张笑明;尹岭;;平瘤康方剂对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用[J];中国康复理论与实践;2007年05期
12 詹奇;胡韶山;郑永日;杨宝峰;;中药治疗胶质瘤作用机制的研究现状[J];哈尔滨医科大学学报;2007年05期
13 崔俐;林卫红;杨弋;徐丹;王绍;张淑琴;;抑胶素对大鼠C6胶质瘤细胞血管内皮生长因子的抑制作用[J];吉林大学学报(医学版);2007年06期
14 罗杰;张力;胡钧涛;李新建;李东升;雷霆;;大鼠骨髓基质细胞移植治疗胶质瘤的实验研究[J];中国实用神经疾病杂志;2008年01期
15 王广军;乔尚琳;施宪孟;;骨髓间充质干细胞对大鼠胶质瘤细胞的趋化性实验[J];济宁医学院学报;2008年04期
16 杨与敏;李凤;毛庆;;胶质瘤的辅助治疗[J];华西医学;2009年04期
17 周朋;苏君;;胶质瘤耐药相关因素的研究进展[J];中国神经肿瘤杂志;2009年02期
18 温林豹;陈刚;;胶质瘤的治疗策略[J];中华神经外科疾病研究杂志;2011年04期
19 李根华;靳峰;;胶质瘤干细胞抗凋亡基因的靶向治疗[J];临床神经外科杂志;2012年03期
20 刘春兴;殷莹;张滨;谢平;邹健;;内源性谷氨酰胺合成酶对C6胶质瘤细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响[J];肿瘤防治研究;2012年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨孔宾;赵世光;刘炳学;陈晓丰;戴钦舜;;K~+通道阻断剂四乙胺对大鼠胶质瘤细胞的增殖和凋亡影响[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
2 黄强;;胶质瘤生成细胞研究[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年
3 潘冬生;;联合基因诱导体内抗胶质瘤免疫反应的实验研究[A];2011中华医学会神经外科学学术会议论文汇编[C];2011年
4 朱永坚;张建民;刘伟国;沈宏;;甲氧胺联合β-榄香烯抑制胶质瘤细胞增殖的实验研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
5 谢爽;王学美;谢东泽;;鲜壁虎提取物抑制C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的研究[A];第九届全国中西医结合肿瘤学术研讨会论文集[C];2002年
6 杨正钦;;姜黄素抑制C6胶质瘤细胞增殖\诱导其凋亡的分子机制[A];第十二届全国神经精神药理学学术交流会论文集[C];2006年
7 张豫滨;杨孔宾;刘赞;叶远柱;赵世光;;组蛋白去乙酰化酶抑制剂增加蛋白酶抑制剂对胶质瘤的凋亡[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
8 石键;傅伟明;张宏;陈鹏;;外源性wt p53基因及对大鼠C6胶质瘤细胞的热增敏效应[A];2008年浙江省神经外科学学术年会论文汇编[C];2008年
9 周朋;刘晓谦;胡炜;;耐药基因的表达与体外药敏试验对胶质瘤化疗的指导意义[A];2011中华医学会神经外科学学术会议论文汇编[C];2011年
10 赵世光;韩大勇;赵洪波;滕雷;李一;;三氧化二砷缓释片体内对C6胶质瘤细胞的抑制作用[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈儇;氯化甲基汞抗鼠胶质瘤细胞作用的体内外实验研究[D];吉林大学;2007年
2 俞磊;胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶基因的检测及其对化疗疗效的影响[D];南方医科大学;2012年
3 范左栩;低氧微环境对体外培养胶质瘤干细胞增殖的影响及机制研究[D];浙江大学;2013年
4 黄吉炜;胶质瘤特异性4optHBS-Msi1/GFAP启动子的构建评价及其在基因治疗中的初步应用[D];北京协和医学院;2009年
5 黄伟;EZH2基因调控脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的实验研究[D];第二军医大学;2010年
6 杨柳松;不同1p杂合性缺失特征少枝胶质瘤的差异蛋白质组学研究[D];复旦大学;2010年
7 杨冰;胶质瘤相关新基因的研究[D];复旦大学;2005年
8 王舒楠;内皮祖细胞参与胶质瘤微血管形成及功能的活体影像学研究[D];第三军医大学;2012年
9 刘国栋;转铁蛋白修饰的载阿霉素氧化石墨烯纳米粒抗胶质瘤实验研究[D];苏州大学;2013年
10 范文海;蛋白酶体抑制剂对胶质瘤细胞诱导凋亡作用及机制研究[D];吉林大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙珊珊;~1H-MRS在检测胶质瘤早期放疗反应中的应用研究[D];山东大学;2012年
2 张军霞;基因工程内皮祖细胞介导的靶向血管新生治疗胶质瘤的研究[D];南京医科大学;2008年
3 李宗豪;胶质瘤干细胞研究进展[D];河北医科大学;2009年
4 李科;苯丁酸钠体外诱导大鼠C6胶质瘤细胞分化及凋亡的研究[D];山东大学;2010年
5 徐鑫;缺氧诱导因子-1α与葡萄糖转运蛋白-3在胶质瘤中的表达[D];河北医科大学;2008年
6 蒋国梁;C6胶质瘤细胞对神经干细胞迁移的实验研究[D];昆明医学院;2009年
7 陈宝敏;胶质瘤干细胞生物学特性比较及放射耐受机制的初步研究[D];苏州大学;2010年
8 唐骏启;牛黄体细胞与C6胶质瘤细胞共培养及凋亡相关基因在大鼠黄体中的表达[D];西北农林科技大学;2009年
9 沈云天;胶质瘤干祖细胞在恶性胶质瘤放射抗拒中作用的初步研究[D];苏州大学;2008年
10 张景泽;逆转录酶抑制剂AZT对大鼠C6胶质瘤细胞作用的体外研究[D];昆明医学院;2009年
中国重要报纸全文数据库 前5条
1 衣晓峰 冯宇曦;中药三氧化二砷有望成为治疗胶质瘤新药[N];中国医药报;2011年
2 记者 匡远深;让胶质瘤干细胞不再“繁殖”[N];健康报;2011年
3 张献怀 张文;瘤区埋雷 持续杀伤[N];健康报;2007年
4 白毅;人脑胶质瘤基础与应用研究喜结“九大硕果”[N];中国医药报;2006年
5 王德江;刘藏;王贵怀;曹勇;王新生;肖新如;交流最新进展 提高诊治水平[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978