体外预测己烯雌酚引起药物—药物相互作用的可能性

【摘要】：目的体外实验考查己烯雌酚对五种主要细胞色素P450酶亚型活性的抑制作用,以评估己烯雌酚(DES)通过抑制这五种细胞色素P450(P450,CYP)亚型而引发药物药物相互作用的可能性。 方法:混合人肝微粒体与不同浓度的DES(或阳性抑制剂)、五种主要细胞色素P450酶的探针底物在37oC条件下孵育相应的反应时间后,用高效液相色谱-紫外吸收(HPLC-UV)法观察探针底物的代谢产物的生成率,计算IC50值。进一步,选取不同的探针底物浓度(覆盖Km值)和DES浓度(覆盖IC50值)测定出相应的代谢速率,用Lineweaver-Burk作图和Dixon作图来判断可逆抑制类型,再用二次作图(Lineweaver-Burk作图中各线的斜率对DES浓度作图)来计算抑制动力学参数Ki。单点失活法用于测定DES对五种主要细胞色素P450酶是否有基于机理的抑制。结合Ki值和DES的最大血药浓度(Cmax)对体内产生的药物-药物相互作用进行预测。 结果:己烯雌酚对CYP3A4, CYP2C8,CYP2C9和CYP 2E1体现出浓度依赖型的抑制,相应的IC50值分别为6μmol·L~(-1),4.9μmol·L~(-1), 3.6μmol·L~(-1)和30μmol·L~(-1)。DES对CYP3A4, CYP2C8,CYP2C9和CYP 2E1抑制的Dixon作图的交点都在第二象限,而Linewever-Burk作图的交点都在纵轴上,这两方面证据共同证实DES对CYP3A4, CYP2C8,CYP2C9和CYP 2E1抑制属于竞争型抑制。二次作图计算出相应的Ki值为4.4μmol·L~(-1) (CYP3A4)和8.0μmol·L~(-1) (CYP2C8)3.0μmol·L~(-1) (CYP2C9)和5.0μmol·L-(1CYP2E1)。DES对CYP3A4, CYP2C8,CYP2C9,CYP1A2和CYP 2E1不存在基于机理的抑制。利用DES的最大血药浓度(Cmax=18.7μmol·L~(-1))计算出AUC的增加值分别为4.3(CYP3A4代谢的底物)和2.3(CYP2C8代谢的底物),6.2(CYP2C9代谢的底物)和3.7(CYP2E1代谢的底物)。 结论:DES对CYP3A4, CYP2C8,CYP2C9和CYP 2E1的活性有较强的抑制作用,对CYP1A2几乎无抑制作用。所以在临床常用的剂量条件下,很容易诱导药物-药物相互作用。当DES与CYP3A4, CYP2C8,CYP2C9或CYP 2E1主要代谢的药物联用时,潜在的药物-药物相互作用应该格外注意。