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β1,4半乳糖基转移酶I与激素、TGF-β1在胚胎着床调控中的作用

谢云鹏  
【摘要】:哺乳动物的胚胎着床是一个极其复杂的过程。胚泡侵入性和子宫内膜容受性的建立是保证胚胎成功着床的关键。在这一过程中,雌激素和孕激素通过细胞内受体作用于子宫内膜,使其血管充血和间质水肿,为胚胎着床提供了物质基础。同时子宫内膜细胞分泌大量细胞因子、蛋白水解酶等物质,来促进胚胎与子宫内膜的相互识别与黏附。 β1,4-半乳糖基转移酶I(β1,4-GalT-I)分为短链和长链两种表型,分别分布于高尔基体和细胞膜这两种亚细胞结构上。位于高尔基体上的β1,4-GalT-I执行着糖基转移酶的功能;位于细胞膜上的β1,4-GalT-I则充当一种细胞黏附分子,在精卵识别、细胞黏附、神经轴突的生长、肿瘤细胞迁移等过程中起着重要作用。 TGF-β1属于人转化生长因子-β超家族成员之一,具有促进细胞增殖及抑制细胞增殖的双向功能,对于不同的靶细胞以及同一靶细胞的不同功能状态会呈现出不同的生物学作用。 目的:本文主要探讨激素对β1,4-GalT-I表达的影响及β1,4-GalT-I与TGF-β1在胚胎着床过程中的相关性,进而探讨胚胎着床的调控机理。 方法:(1)、将雌激素和孕激素按照时间和浓度梯度分别与RL95-2细胞(模拟着床期子宫内膜细胞)共培养,利用RT-PCR方法检测总β1,4-GalT-I表达情况。(2)、将已构建好的β1,4-GalT-I基因过表达质粒和空载体质粒分别转染到RL95-2细胞,采用Western-blotting技术分别检测各组转染细胞的总β1,4-GalT-I和长链β1,4-GalT-I蛋白表达情况。(3)、将已构建好的β1,4-GalT-I基因过表达质粒、干扰质粒、干扰对照质粒和空载体质粒分别转染到RL95-2细胞,采用RT-PCR和免疫荧光技术分别检测各组转染细胞的总β1,4-GalT-I和长链β1,4-GalT-I基因表达情况及其对TGF-β1基因表达的影响。(4)、将雌激素和孕激素按照10~(-4)μg/μl的浓度,分成正常组、对照组、雌激素组、孕激素组和雌孕联合组与RL95-2细胞共培养48h,与(3)方法转染结束所收集的上清液,一起利用ELISA技术检测各组细胞TGF-β1表达的变化。 结果:(1)、β1,4-GalT-I基因分别在孕激素和雌激素的作用下,并呈现时间、剂量-效应的依赖关系。总β1,4-GalT-I表达在雌激素作用浓度为10~(-4)μg/ul,时间为12h时,达到峰值(P0.05);总β1,4-GalT-I表达在孕激素作用浓度为10~(-4)μg/ul,时间为12h时,达到峰值(P0.05)。(2)、RL95-2细胞经β1,4-GalT-I基因过表达质粒转染后,检测其总β1,4-GalT-I和长链β1,4-GalT-I蛋白量增高(P0.05)。(3)、在被转入四种调控β1,4-GalT-I基因表达质粒并培养24h后,通过检测RL95-2细胞内绿色荧光蛋白的出现判断转染效果:过表达组、干扰组、空载组和干扰对照组有绿色荧光蛋白表达,判断转染效果良好。RL95-2细胞经β1,4-GalT-I基因过表达质粒转染后,检测其总β1,4-GalT-I基因和长链β1,4-GalT-I基因增高(P0.05),但TGF-β1基因表达变化不明显。在转染β1,4-GalT-I基因干扰质粒后,检测其总β1,4-GalT-I基因和长链β1,4-GalT-I基因降低(P0.05),但TGF-β1基因表达变化不明显。(4)、经雌激素和孕激素处理RL95-2细胞后,检测激素处理组TGFβ1的O.D.值明显高于正常组和对照组(P0.05),但是经质粒转染后所得TGFβ1的O.D.值无明显变化。 结论:(1)、激素可能通过β1,4-GalT-I调控胚胎着床。(2)、β1,4-GalT-I对TGF-β1无明显影响。(3)、激素可调节TGF-β1表达。


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